Mikroplaka okuyucu kullanarak bakteri büyümesinin hassas ve yüksek verimli analizi

Öncelikle, daha önce erken üstel aşamaya kadar yetiştirilmiş gliserol stokunda korunmuş bakterilerle başlayın; böylece düzgün fizyolojik durumlar ve tekrarlanabilir büyüme sağlanır.

Bakterileri eşit şekilde yeniden süspertetmek için büyüme ortamı ve girdap ekleyin.

Süspansiyonu yeni ortam kullanarak seri olarak seyreltirerek başlayacak hücre yoğunlukları elde edin.

Örnekleri çok kuyu plakasının iç kuyruklarına yükleyin, kenar kuyular buharlaşmaya bağlı değişkenliği en aza indirmek için boş maddeyle doldurulsun.

Plakayı, sürekli sallanma ve bakteri büyümesi için optimal sıcaklık sağlamak amacıyla mikroplaka okuyucuya yerleştirin.

Bakteriler çoğaldıkça, kültürün optik yoğunluğu veya OD artar.

Belirli aralıklarla OD'yi ölçün.

Boş kuyulardan elde edilen ilk OD değerlerini çıkararak arka plan emilimini düzeltin.

Sonra, belirli zaman aralıklarında ardışık OD değerlerinden büyüme hızını hesaplayın, böylece bakteriyel büyüme dinamiklerinin yüksek verimliliği ve hassas nicelleştirilmesi sağlanır.

Büyümenin gerçek zamanlı kaydı için, sterilize edilmiş bir reaktif rezervuarına yaklaşık 25 mililitre M63 ekleyin. Sonra, seri seyreltme yapmak için mikrotüplere 900 mikrolitre M63 ekleyin. Sonra, erimiş gl