Mikroplaka okuyucu kullanarak bakteri büyümesinin hassas ve yüksek verimli analizi

Öncelikle, daha önce erken üstel aşamaya kadar yetiştirilmiş gliserol stokunda korunmuş bakterilerle başlayın; böylece düzgün fizyolojik durumlar ve tekrarlanabilir büyüme sağlanır.

Bakterileri eşit şekilde yeniden süspertetmek için büyüme ortamı ve girdap ekleyin.

Süspansiyonu yeni ortam kullanarak seri olarak seyreltirerek başlayacak hücre yoğunlukları elde edin.

Örnekleri çok kuyu plakasının iç kuyruklarına yükleyin, kenar kuyular buharlaşmaya bağlı değişkenliği en aza indirmek için boş maddeyle doldurulsun.

Plakayı, sürekli sallanma ve bakteri büyümesi için optimal sıcaklık sağlamak amacıyla mikroplaka okuyucuya yerleştirin.

Bakteriler çoğaldıkça, kültürün optik yoğunluğu veya OD artar.

Belirli aralıklarla OD'yi ölçün.

Boş kuyulardan elde edilen ilk OD değerlerini çıkararak arka plan emilimini düzeltin.

Sonra, belirli zaman aralıklarında ardışık OD değerlerinden büyüme hızını hesaplayın, böylece bakteriyel büyüme dinamiklerinin yüksek verimliliği ve hassas nicelleştirilmesi sağlanır.

Büyümenin gerçek zamanlı kaydı için, sterilize edilmiş bir reaktif rezervuarına yaklaşık 25 mililitre M63 ekleyin. Sonra, seri seyreltme yapmak için mikrotüplere 900 mikrolitre M63 ekleyin. Sonra, erimiş gliserol stokuna ve vortekse 900 mikrolitre M63 ekleyin.

10 kat seyreltmeden 100 mikrolitre, içinde 900 mikrolitre M63 ve girdap içeren başka bir mikrotüpe aktarın. Bu adımı istenen seyreltme sayısına ulaşana kadar tekrarlayın. Şimdi, sterilize edilmiş 96 kuyu düz taban mikroplakasının kenarındaki kuyuyu, sekiz kanallı pipet kullanarak 200 mikrolitre M63 ile doldurun.

Her seyreltilmiş örnekten 200 mikrolitre, referans tablosuna göre mikroplaka kuyularına yüklenin. Isıtma ve tohumlama verimliliği nedeniyle dağılma katmanlarından kaçınmak için, örnekleriniz için mikroplakanın kenarındaki kuyuları asla kullanmayın ve aynı örneği mikroplakanın farklı noktalarında birden fazla kuyuya yükleyin. 96 kuyruklu mikroplakayı plaka okuyucuya yerleştirin.

Görev Yöneticisi'nde Şimdi Oku ve programı seçin. Ölçümeye başlamak için Tamam'a tıklayın. Son olarak, kaydı veri analizi için yeni bir deneysel dosya olarak kaydedin.