Asit Stresi Altında E. coli'de Asitle Aktive Edilmiş Bir Şaperonun Koruyucu Rolünün Değerlendirilmesi

Çevresel strese duyarlı rekombinant E. coli kültürlerini ele alalım.

Test kültürü, asitle aktifleşmiş bir şaperonu kodlayan bir plazmid taşırken, kontrol kültürü yalnızca plazmid omurgasını taşır.

Plazmid tutulmasını sağlamak için tek kolonileri antibiyotikli ortama aşılayın ve bakteri büyümesini teşvik etmek için kuluçka yapın.

Kültürleri, antibiyotik içeren ve şaperon ifadesini aktive etmek için bir indüktör içeren taze ortamda seyreltirin.

Kültürleri orta log fazına kadar büyütün, ardından belirli bir optik yoğunluk elde etmek için seyreltirin.

pH düşürmek için asit ekleyin, bu da asit stresine neden olur.

Test kültüründe, asidik koşullar hücresel proteinleri stabilize eden ve toplanmalarını engelleyen şaperonu aktive eder. Kontrol kültüründe, şaperonun yokluğu hücresel proteinlerin denatüre olup birikmesine neden olur.

PH'ı nötralize etmek ve asit stresini durdurmak için bir baz ekleyin.

Zaman içinde optik yoğunluğu ölçerek bakteri büyümesini izleyin.

Test kültüründeki artış büyümesi, refatörün asit stresi sırasında koruyucu rolünü gösterir.

50 mililitre LB'de Ampisilin ile gece kültürü hazırlayın ve hücreleri 200 RPM ile 30 derece Celsius'ta yetiştirin. Gece kültürlerini 40 kat seyrelti