JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:14 dk. • November 28th, 2025
Besin açısından zengin bir agar ortamında yetiştirilen patojenik bir bakteri kolonileriyle başlayın.
Genetik olarak homojen bir bakteri hücre popülasyonunu sağlayan ve genotipleme sırasında değişkenliği azaltan tek bir koloni seçin.
Steril aşılama döngüsü kullanarak, seçilen koloni ultrasaf suya aktararak numuneye kirletici girme riskini en aza indirin.
Askıyı girdabla vurarak koloniyi kırın ve bakteri hücreleri eşit şekilde dağıtın.
Sonra, dış zar, peptidoglikan tabakası ve iç zardan oluşan bakteriyel hücre zarfını bozmak için süspansiyonu ısıtın.
Bu, bakteri hücrelerinin hücre içi içerikleri, genomik DNA dahil olmak üzere, suya salgılamasına neden olur.
Süspansiyonu yüksek hızda santrifüjle yaparak hücresel kalıntıları genomik DNA'dan ayırın.
Üst yüzeyi sonraki genotipleme uygulaması için yeni bir tüpe aktarın.
Başlamak için, Petri kaplarında uygun herhangi bir agar türüne steril aşılama halkaları ekmek için steril aşılama halkaları kullanın. 22 derece Celsius'ta bir ila iki gün veya 15 derece Celsius'ta üç ila dört gün kuluçka yapın. Bunun ardından, aşılama döngüleri kullanılarak, her Petri kabından tek bir temsilci koloni seçilir ve 50 mikrolitre ultra saflaştırılmış su içeren 1,5 mililitrelik santrifüj tüplerine aktarılır ve yeniden süzülür.
Vortex kısa süreliğine ve 100 derece Celsius'ta bir ısıtma bloğunda yedi dakika kuluçka yapın. Sonra, 16.000 g ile üç dakika boyunca santrifüj yapın ve bir pipet kullanarak süpernatant şablon DNA'yı dikkatlice boş 1,5 mililitrelik santrifüj tüplerine aktarın. Bir sonraki adıma geçin veya DNA'yı eksi 20 derece Celsius'ta saklayın.