JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:54 dk. • November 28th, 2025
İnsan ağzında yaygın olarak bulunan sentetik bakteri topluluğu içeren bir tüple başlayın.
Ağız ortamını taklit etmek için müsin, bir glikoprotein ve α-amilaza enzimi içeren simüle edilmiş tükürük sıvısı ekleyin, ardından sallama ile kuluçka yapın.
Bakteriler, kükürtüğü destekleyen müsinle etkileşime girerken, α-amilaza tükürüğün enzimatik koşullarını taklit eder.
Bir örnek topla.
Sonra, mide ortamını taklit etmek için asidik pH'da müsinli mide sıvısı edin ve sallama ile kuluçka yapın.
Asidik koşullar asite duyarlı bakteri türleri öldürür, ancak asite toleranslı ve müsin kaplı, hafif asite tolerans bakteri türler hayatta kalır.
Bir örnek daha topla.
Son olarak, bikarbonat ve fizyolojik tuzlar içeren simüle edilmiş bağırsak sıvısı ekleyin. Sallama ile kuluçka yapın.
Tuz açısından zengin ortam, iyonik stresi tetikler; bu da bakteri zarını bozur ve canlılığı azaltır.
Son bir örnek topla.
Üç simülasyon sonrası örnek de artık bakteriyel canlılık değerlendirmesine hazırdır.
Ağız sindirimini simüle etmek için, bakteri topluluğunun 3 mililitresini 50 mililitrelik steril bir tüpte aktarın ve 3 mililitre simüle edilmiş tükürük sıvısı veya SSF ile karıştırın.
İnsan tükürüğü tip 9A'dan mililitre başına 75 birim alfa-amilaz, domuz midesi tip 2'den ise litreye iki gram müsin ekleyin. Karışımı 37 derece derece ve 100 RPM'de iki dakika kuluçka edin. DNA çıkarımı ve akış sitometrisi niceliği için 2 mililitrelik bir örnek toplayın.
Mide sindirimini simüle etmek için, bakteriye 3 mililitre 4 mililitre simüle edilmiş mide sıvısı veya SGF ekleyin. Gerekirse pH'ı 3'e ayarlamak için bir azı dişi HCL kullanın. Örneği 37 derece Celsius ve 100 RPM'de iki dakika kuluçka yapın.
Sonra 2 mililitrelik bir örnek alın. İnce bağırsak sindirimi için, bakteriye 4 mililitre simüle edilmiş bağırsak sıvısı veya SIF ekleyin. Gerekirse pH ayarlamak için sodyum hidroksit kullanın.
Sonra örneği 37 derece celsius ve 100 RPM'de iki dakika kuluçka altına alın ve 2 mililitrelik bir örnek alın.