Pseudomonas şıringaelerinde bakteriyosin aracılı öldürmeyi tespit etmek için yumuşak agar örtü testi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 3:17 dk • November 28th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sıcak sıcaklıkta tutulan yumuşak erimiş bir agar ile başlayın.

Pseudomonas şırıngae kültürünü, test suşunu agar'a aşılayın.

Sonra hücreleri eşit dağıtmak için kısa bir girdap yapın.

Karışımı sertleşmiş bir agar tabağına dökün ve eşit şekilde yayın.

Kapağı kapatın ve sertleşmesine izin verin.

Katı agarın yüzeyinde filtrelenmiş bir üst yüzey tespit edin.

Üst yüzey, stres kaynaklı donör P. syringae suşundan türetilen antibakteriyel bir bakteriyosin molekülü içerir.

Plakayı inkubka ederek bakteriyel büyüme ve bakteriyosinin agara yayılmasını sağlar.

Bakteriyosin, test süzümündeki belirli yüzey reseptörlerine bağlanır ve zarını bozarak hücre ölümüne yol açar.

Bu, agar üzerinde temiz bir bölge oluşmasına yol açar ve test suşunun antibakteriyel molekül bakteriosin tarafından öldürüldüğü alanı gösterir.

Kültürü 1'den 100'e kadar taze KB'ye seyrelt. Kültürü oda sıcaklığında çalkalayarak üç ila dört saat kuluçkaya geçirin. Sonra, ultra saf suda bir süspansiyon askısını kullanarak sterilize edilmiş su agarı hazırlayın.

Erimiş yumuşak agarı kullanmadan önce 60 derece Celsius su banyosunda tutun. Steril serolojik pipet kullanarak, üç mililitre yumuşak agar steril kültür tüpüne aktarın. Kültür tüpünü su banyosuna geri götürerek erimiş halde kalmasını sağlar.

Kaplamayı dökmeden önce, erimiş agarın soğumasına izin verin, ancak sertleşmesine izin vermeyin.

Agarın aşılamadan önce sıcak, tamamen erimiş halde tutulması kritik öneme sahiptir. Eğer olmazsa, üst katman grenli bir görünüme sahip olur ve yorumlanması daha zor olur.

Steril bir başlıkta, test suş kültüründen 100 mikrolitre inokulasyonu yumuşak agar ve girdaba aşılayarak karıştırın. Kültürü elle 10-15 saniye döndürün, ardından bir agar tabağının altına dökün. Plakayı her yöne eğin ki yumuşak agar, alt agari eşit şekilde kaplasın.

Tabağı kapatın ve 20-30 dakika boyunca sertleşmesine izin verin. Katılaşırken plakayı rahatsız etmemeye dikkat edin. Sertleştikten sonra, üst tabakaya iki ila beş mikrolitre süpernatant yerleştirin.

Plakaların oda sıcaklığında gece boyunca kuluçkaya düşmesine izin verin. Ertesi sabah sonuçları gözlemleyin ve kaydedin. Bu yöntemle, iki P. syringae sturu farklı bakteriyosinler tarafından inhibe edilir. A suşu, yüksek moleküler ağırlıklı bir bakteriosin, tailocine duyarlıdır, ancak alternatif, düşük moleküler ağırlıklı bir bakteriosine duyarlı değildir.

07:54

Bakteriyosin Etkilerini Farenin Bağırsak Mikrobiyolojisi Üzerine Etkileyen Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:22

Gıda Kaynaklı Patojenlerin Biyokontrolü için Bakteriyofaj Etkinliği Yüksek Verimli Ayarlarla Değerlendirildi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:10

Gram-pozitif bakteriyel büyümenin küçük moleküllü bir inhibitörü olan masarimisinin sentezi

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:29

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:49

Bakteriyosin Üreten Murin Fekal Bakteri İzolatlarının Antimikrobiyal Potansiyelinin Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:37

Bakteri Kaynaklı Antimikrobiyal Bileşiklerin Etkisini Değerlendirmek için Ertelenmiş Bir Büyüme İnhibisyonu Testi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:05

Kaplama Testi kullanarak niteliksel Pnömokok Bakteriyosinlerin Bakteriyel Üretim ve Hassasiyet Tedbir

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:31

Modüle c-di-GMP sinyal İşte Küçük Moleküller Tarama için Yüksek verim Kur kurulması Pseudomonas aeruginosa

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:38

Yumuşak agar üst tabaka tekniği kullanımı bakteriyel olarak üretilmiş önleyici bileşiklerin taranması için

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:02

Yükselen Bulaşıcı Patojenlerin Giderilmesi İçin El Yıkama Etkinliğini Test Etmenin Bir Metodu

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026