Strese Uyum Sağlamış Bakterilerin Tek Koloni Seçimi Yoluyla İzolasyonu

Uzun süre stres koşulları altında yetiştirilmiş bir bakteri kültürü alın.

Uzun vadeli stres, kendiliğinden mutasyonlara, doğal seçilimle ve strese uyum sağlamış bakterilerin çoğalmasına yol açar.

Bu bakterileri izole etmek için, aynı stresörü içeren bir agar plakasına küçük bir hacim kültürü yerleştirin ve kuluçka yapın.

Stres faktörü, yalnızca strese uyum sağlamış bakteri kolonilerinin büyümesini sağlar.

Genetik saflığı korumak ve stres faktörünü sıvı ortamla aşılamak için tek bir koloni seçin.

Strese uyum sağlamış bakterilerin büyümesini kolaylaştırmak için sallama ile kuluçka yapın.

Küçük bir kültür hacmini kullanarak taze medyayı stres kaynağı ile aşılayın.

Aynı zamanda, stres faktörünü içeren başka bir ortamı vahşi tip veya strese uyum sağlaymayan bakterilerle aşılayın.

Bakteri büyümesinin bir göstergesi olarak düzenli aralıklarla soğurmayı ölçün.

Strese uyum sağlamış bakterilerin başarılı izolasyonunu sağlamak için büyüme profilini karşılaştırın.

Aynı stres faktörünü içeren %1,6 agar levha ortamı ile aynı konsantrasyonda hazırlayın. Chemostat'tan çıkış kültüründen 0,1 mililitre levha alın ve 37 derece Celsius'ta 16 saat kuluçka yapın. İnkubasyon sonrası, steril bir kürdanla plakadan tek koloniler alın ve kemostattaki aynı stres faktörü ve aynı orta konsantrasyonda içeren 15 mililitrelik test tüplerinde aşılanın.

Altı saat kuluçka edin. Kültür suyundan bir mililitre, içinde 50 mililitre medyum içeren 250 mililitrelik erlenmeyer şişesine aktarın. Her saat 0,5 mililitre kültür suyu hasat edin ve optik yoğunluğu 600 nanometrede ölçün.

Adapte edilmiş suşun büyüme hızını, stres faktörü göz önüne alındığında vahşi tip suşun büyüme oranıyla karşılaştırın