$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Çevresel kirleticileri bozan bakteriler dahil olmak üzere çeşitli mikroplar içeren bir deniz suyu örneği alın.
Örneği seri olarak seyreldin ve mikrobiyal yoğunluğu azaltın ve besin ortamına tabaklayın.
İnkubasyon sonrası, genetik ve metabolik olarak çeşitli bakteri tiplerini barındırabilecek morfolojik olarak farklı koloniler seçilir.
Her seçilmiş koloniyi tek hücreleri dağıtmak ve kuluçka yapmak için çizgi çizerek geçirin.
Her hücre, genetik olarak saf ve belirgin metabolik profile sahip bir bakteriyel izolat oluşturan bir koloni oluşturur.
Her izolatı bir büyüme ortamına aşılayın ve biyokütle artırmak için kuluçka yapın.
Kültürü santrifüjleyin, süpernatantı atın ve kalan ortamı çıkarmak için bir tampon ile yıkayınız.
Hücreleri tampondaki yeniden askıya alın ve çevresel bir kirletici olan EE2 içeren bir seçim ortamına aşılayın.
Ortamdaki tek karbon kaynağı olan EE2, enerji ve büyüme için onu metabolize edebilen bakterileri seçer.
Ortamdaki bulanıklık, kirletici bozucu bakteri izolatın izole edildiğini doğrulayan bakteri büyümesini gösterir.
Bakteri seçmek için, önce mercan örnekleri için steril tuzlu çözeltide 10'dan negatif dokuza kadar seri seyreltmeler yapılabilir; su örnekleri için ise 10'dan negatif altıya kadar devam eder. Pipet boyunca beş kez yukarı aşağı seyreltir, sonra ucu atılır.
Sonra her birini girdabla kur. Bir sonraki seri seyreltme yapmadan önce her seferinde örnekleri beş saniye vortex edin. Her seyreltmeden 100 mikrolitre, %3 sodyum klorür lizojeni suyu agari içeren Petri kablarında pipet yapın ve tabakla tabaklayın.
Plakaları hedef sıcaklıkta, örneğin 26 derece Celsius sıcaklığında bir ila üç gün kuluçka altına alın. Plakaları günde bir kontrol et. Yeni plakalarda belirgin büyüme morfolojileri sunan kolonileri çizgi plaka tekniği ile seçip izole et.
Bu adımı plakalarda saf koloniler büyümesi için gerekli sayıda tekrarlayın. İzolatları dört derece Celsius veya el yazmasında tarif edildiği gibi gliserol içinde sakla. EE2 bozulma yeteneği testi yapmak için, taze plakalardan tek bir koloni seçin ve iki mililitre steril LB ortamına bir tüpte aşılayın.
Eğer gliserol stokuysa, 10 mikrolitre gliserol bakteri stoku alın ve LB agar plakalarına çizin. Tek kolonilerin büyümesi için gece boyunca 24 ila 28 derece Celsius sıcaklıkta kuluçka yapın. LB ortamı içeren tüpü gece boyunca 150 kat g g, 24 ila 28 derece Celsius sıcaklıkta sürekli eğimli şekilde yerleştirin.
Bakteri büyümesinden sonra, hücreleri oda sıcaklığında sekiz dakika boyunca 8.000 kat g ile santrifüj ederek pellet yapın. Üst yüzeyi at. Kalan LB çorbasını yıkamak için, hücreleri yeniden süslemek için iki mililitre tuzlu su ekleyin.
Karbon kaynağı izi kalmadığından emin olmak için yıkamayı iki kez tekrarlayın. Yıkanmış ve yeniden askıya alınmış hücreleri, tek karbon kaynağı olarak EE2 içeren minimum Bushnell Haas kültür ortamında aşılayın. Bakteri büyümesi, 600 nanometrede optik yoğunluk ve kolonimiz oluşum birimleriyle LB agar ortamında 16 ila 72 saatlik kuluçkadan sonra değerlendirin.