Deniz Suyu Örneklerinden Petrol Bozucu Deniz Bakterilerinin Seçici Zenginleştirmesi ve İzolasyonu

Hidrokarbonları bozunabilen bakteriler dahil olmak üzere çeşitli mikrobiyal topluluklar içeren bir deniz suyu örneğiyle başlayın.

Mikrobiyal yoğunluğu azaltmak için numuneyi tuzlu sendede seri seyreltmeler yapın.

Steril damıtılmış suya ham yağı ekleyin ve karışımı karıştırarak yağın hidrokarbon bileşenlerini kısmen çözünürebilirsiniz.

Karışımın çökmesine izin verin, suda çözünen ve suda çözünmeyen yağ fraksiyonlarına ayırın.

Çözünen veya hidrofobik hidrokarbonları bozan bakterileri zenginleştirmek için her yağ fraksiyonunu tek karbon kaynağı olarak kullanan seçici agar plakaları hazırlayın.

Sulandırılmış deniz suyu örneklerini seçici ortama örtüp ortam sıcaklığında kuluçka yapın.

Ortaya çıkan koloniler, hidrokarbonları metabolize etmek için hidroksilazlar ve dioksijenazlar gibi enzimlere dayanır.

Morfolojik olarak farklı koloniler seçip aynı yağ fraksiyonunu içeren taze ortama yeniden yerleştirerek hidrokarbon bozdurucu bakterilerin saf kültürlerini elde edin.

Bu yöntem, petrol bozucu deniz bakterilerinin seçici izolasyonunu sağlar.

Tek karbon kaynağı olarak yağ-suda çözünürken fraksiyon ve yağ-su çözünmeyen fraksiyon içeren minimum ortam hazırlaymak için, alt kısmında valf bulunan bir filtre şişesine 500 mililitre steril damıtılmış suya %1-2 ham yağ ekleyin. Matayı 24 ila 28 derece sıcaklıkta, 150 kat g ile 48 saat boyunca sürekli çaltarak tutun. Bundan sonra, matayı sabit bir yüzeye koyun ve çözünürken çözünmeyen fraksiyonun ayrılmasını sağlamak için 10-20 dakika bekleyin.

Sonra alt filtre şişesini açın, yağ-suda çözünürken fraksiyonu yeni steril bir şişeye aktarın, böylece yağ-su çözünmeyen fraksiyonu koruyun. Sonra iki şişe Bushnell Haas agar minimum ortamı hazırlayın. Otomatik olarak otoklav yapın.

Yağ-suda çözünen fraksiyonu ile birleştirin, 500 mililitre agar ortamı oluşturmak için tek karbon kaynağı. Yağ-su çözünmeyen fraksiyonu da aynı şekilde yapın ve her ortamdan yaklaşık 25 mililitreyi bireysel Petri kablarına aktarın. Yağ bozucu bakterileri izole etmek için, daha önce seyreltilmiş örnekleri tekrar kullanın ve her seyreltmeden 100 mikrolitre eritme ile agar ortamı içeren Petri kaplarına pipetleyin ve onları tabakla yerleştirin.

Plakalarınız için negatif kontroller tutmayı unutmayın. Yemekleri hedef sıcaklıkta bir ila üç gün kuluçka yapın ve izolasyon prosedürlerini önceki gibi tekrarlayın.