Mikrofluidik bir sistemde tek hücre çözünürlüğünde bakteri büyümesini takip etmek

Ters floresans mikroskobunun aşamasına monte edilmiş mikrofluidik bir cihazla başlayın.

Cihaz, yatay besleme kanallarına sahip bir polimer çipten oluşur. Her kanal, bir ucundan kapatılan ve bakteri hücrelerini doğrusal zincirlerde tutacak şekilde tasarlanmış dar hendeklerle kaplıdır.

Siperlerin içinde, floresan bir protein ifade eden hareketsiz bakteri hücreleri bulunur ve bu hücreler görselleştirmelerini sağlar.

Her besleme kanalı, kontrollü bir akış hızında besin açısından zengin ortam sağlayan şırınga pompalarına bağlıdır.

Akışı başlatın, ortamın siperlere yayılmasını ve bakteri büyümesini desteklemesini sağlayın.

Sınırlı bakteriyel hücreler siper içinde bölünerek bir yadan zinciri oluşturur.

Hendek tasarımı, açık uçtaki yeni hücrelerin yıkanmasını sağlar ve en eski hücrelerin uzun vadeli izini mümkün kılar.

Bireysel bakteri hücrelerinin büyümesini ve bölünmesini takip etmek için zaman içinde hendeklerin görüntülerini yakalamak.

Yüklü cihazı, PDMS'nin iki yanındaki kapak camını sahne girişinin altına bantlayarak dikkatlice bir sahne girişine monte edin. Sahne yerleştirme cihazı montajını PDMS'nin yukarıya bakacak şekilde ters çevirip tozsuz bir silecek gibi yumuşak bir yüzeye yerleştirin.

Birinci faz şırınga pompasının akış hızını dakikada 35 mikrolitre ayarlayın. Sonra bir şeritle hareket ederek giriş iğnesini ve ardından atık beaker'e giden çıkış iğnesini yerleştirin. Cihazı sızıntı açısından görsel olarak inceledikten sonra, çıkış borusunu orta menisküste bulanık bir şerit şeklinde görünen ve atık beaker'e doğru yavaşça hareket eden fazla hücreler için inceleyin.

Cihaz yaklaşık 15 dakika çalıştıktan sonra, birinci faz şırınga pompasını dakikada 1,5 mikrolitre ayarlayın ve akışı durdurun. Tüm pompa ve cihaz cihazını ters floresan mikroskopa getirin ve birinci faz ortam akışını dakikada 1,5 mikrolitre ile yeniden başlatın. Cihazla birlikte sahne insertini dikkatlice mikroskopa monte edin, giriş ve çıkış borusunu yönlendirmek için gerektiği kadar bant kullanın.

Cihazda görüntüleme için uygun pozisyonları bulun ve istendiği gibi görüntülemeye başlayın. Hücrelerin genellikle sabit halli, üstel faz büyümesini okumak için birkaç saat sürdüğünü ve görüntü alımının isteğe göre gecikmeli olabileceğini, böylece görüntülemenin denge döneminden sonra başlayabileceğini unutmayın.