Mikrofluidik Cihaz Kullanarak Bakteriyel Hareketliliğin Değerlendirilmesi

Bakteriyel hareket için gözenekli kanallardan oluşan mikrofluidik bir odaya bağlı bir giriş borusundan oluşan bir mikrofluidik cihaz alın.

Oda, çıkış borusu üzerinden bir şırınga pompasına bağlı olan bir gözlem odasına bağlıdır.

Hava kabarcıklarını çıkarmak için odaları bir tampon ile doydurun.

Cihazı mikroskop aşamasına yerleştirin ve objektif lensi gözlem odasının üzerine yerleştirin.

Mikroskop ayarlarını bireysel bakteri hücrelerini net görselleştirmek için ayarlayın.

Giriş borusunu floresan etiketli bakterilerden oluşan bir süspansiyona yerleştirin.

Bakterileri mikrofluidik odaya çekmek için akışı başlatın; burada bakteriler gözenekli kanallardan geçerek gözlem odasına ulaşır.

Gözlem odasını düzenli aralıklarla görebilirsiniz.

Gözenekli matriksin içinden geçen bakteri oranını temsil eden bir kırılma eğrisi oluşturun.

Mikrofluidik vakumdan alın ve mikroskop aşamasına yerleştirin. Şırınga pompasını kullanarak hareketlilik tamponu ile doyurun.

Brightfield mikroskobu veya faz kontrastı kullanarak, büyütmeyi bireysel bakteri hücrelerini görselleştirecek şekilde ayarlayın ve gözlem kanalının merkezine odaklanın. Işık yolu ayarlarını floresan mikroskopisine geçirin. Bir ofset ve kamera pozlama süresiyle odaklanarak bireysel bakteri hücrelerini (bu durumda 100 milisaniye) çözebilirsiniz.

Sonra, giriş borusunu bakteriyel süspansiyonu içeren iki mililitrelik bir tüpe yerleştirin. Pompanın yönünü tersine çevirin ve süspansiyonu dakikada bir mikrolitre akış hızıyla çekmeye başlayın.

Tüm gözlem kanalının kesitini tara, her dakika bir görüntü kaydeder.