JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:12 dk. • November 28th, 2025
Besin açısından zengin bir ortam ve önceden hidratlanabilir fermente edilen lif içeren anaerobik bir odaya yerleştirilen bir tüple başlayın.
Tüpün içindeki oksijensiz koşullar, insan kolonunun anaerobik ortamını taklit eder.
Sonra, bağırsak mikropları içeren seyreltilmiş ve homojenleştirilmiş dışkı örneği tüpe ekleyin ve kuluçka yapın.
Mikropları lifle karıştırmak için tüpü düzenli olarak ters çevirin.
İnkubasyon sırasında mikroplar anaerobik olarak lifi metabolize eder ve fermente eder, kısa zincirli yağ asitleri ve diğer metabolitler üreterek ortamın pH'ını düşürür.
Fermente karışımından düzenli aralıklarla aliquotlar toplayarak metabolit üretimini ve pH'larını kontrol edin.
Aliquotları düşük sıcaklıklarda santrifüjle ederek mikrobiyal biyokütleyi bir pelet haline ayırın.
Metabolitleri ve kısa zincirli yağ asitlerini içeren üst yüzeyi yeni bir tüpe aktarın.
Hem mikrobiyal biyokütleyi hem de süpernatantı sıvı azotta dondurun.
Son olarak, örnekleri daha fazla analiz için düşük bir sıcaklıkta saklayın.
Aşılanan tüpleri anaerobik odada 37 derece Celsius sıcaklıkta tutun ve lifleri ve aşıyı yeniden süzülmek için saatte bir nazikçe ters çevirin. 3, 6, 9 veya 24 saat sonra, doğru miktarda fermente ortamı alın ve örnekleri 14.000 kez g ile 10 dakika boyunca dört derece Celsius'ta santrifüj yapın.
Hemen süpernatant ve pelleti sıvı azotta dondurun, ardından anlık dondurmadan sonra süpernatantı kısa zincirli yağ asitleri analizi için ve pelleti mikrobiyom analizi için -80 derece Celsius'ta saklayın.