Otomatik Mikrobiyoreaktörle Farklı Ortam Formülasyonlarında Bakteriyel Büyümenin İzlenmesi

Salgılanan floresan protein ifade eden ve antibiyotik direnç sağlayan bir plazmid barındıracak şekilde genetik olarak modifiye edilmiş bir bakterinin kültürünü ele alalım.

Onu antibiyotik içeren bir ortama aşılayın ve bakteri büyümesini teşvik etmek için çalkalama ile kuluçka yapın.

Antibiyotik, plazmid tutan hücrelerin çoğalmasını sağlar.

Kültür istenen yoğunluğa ulaştığında, otomatik bir sıvı işleme sistemine aktarılır.

Derin bir kuyulu plaka, mikrotiter plakaya dağıtılıp farklı konsantrasyonlarda temel besinler içerir ve bu besinler mikrotiter plakaya dağıtılır ve böylece farklı ortam formülasyonları oluşturulur.

Plakanın her bir kuyusunu bakteriyel kültürle aşılayın.

Plakayı sızdırdırın ve bir mikrobiyoreaktöre yerleştirin; bu mikro biyoreaktör eşit sıcaklık ve havalandırmayı koruyor.

Farklı formülasyonlar bakteriyel büyüme ve floresan protein salgılanmasında farklılıklara yol açar.

Cihazdaki optik sensör, hücre yoğunluğunu ve floresansı ölçerek bakteri büyümesi ile floresan protein üretiminin medya formülasyonları arasında karşılaştırılmasını sağlar.

Stok çözelti deposu için derin kuyu plakalarını, levhaları %70 etanol ile silerek ve ardından laminar akış başlıkta kurutarak steril edin. Tohum kültürüne, çalışan hücre bankasından bir aliquot ile litrede 25 miligram kanamisin içeren 50 mililitre BHI ortamı aşılayarak başlatın. Gerekli tüm laboratuvar aletlerini robotik çalışma masasına yerleştirin ve ilgili laboratuvar aletlerine stok çözgütlerini dökün.

Sonra, tohum kültürünün başlangıcına kadar son aşama olan aşılama aşamasına ulaşılması için ortam hazırlamak için robotik çalışma akışını başlatın. Yaklaşık iki saat sonra tohum kültüründen örnek alın ve optik yoğunluk 600 nanometre veya_{OD 600} ölçülerek büyümeyi izleyin. Her saat büyümeyi izlemeye devam edin.

Yaklaşık beş saat sonra, kültür üç ile dört arasında_{OD 600'e} ulaşır ve ana kültürlerin aşılanması için kullanılır. Tohum kültürünü sıvı işleyici çalışma masasına yerleştirin ve medya hazırlama protokolünü sürdürün. Aşılamadan sonra yetiştirme mikrotiter plakalarını mühürleyin.

Sonra, mühürlü yetiştirme MTP'sini Biyolektor cihazına yerleştirin. Sonra, önceden tanımlanmış yetiştirme protokolünü başlatın.