JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:35 dk • November 28th, 2025
Bir siyanobakteriyel suşun bir döngüsünü büyüme ortamına aşılayarak başlayın. Hücrelerin istenen yoğunluğa ulaşmasını sağlamak için kuluçka yapın.
Hücreleri santrifüjle yıkayın ve kalıntı metabolitler ile kalıntı içeren süpernatantı atın.
Pelleti küçük hacimli bir büyüme ortamında yeniden askıya alın ve konsantre bir süspansiyon oluşturulur.
Bu süspansiyonun bir aliquotunu gliserol ile karıştırın; bu kriyoprotektan membranı stabilize eder ve dondurma sırasında buz kristali oluşumunu önler.
Başka bir aliquot'a, hücrelere nüfuz eden ve buz nükleasyonunu engelleyen kriyoprotektan olan dimetil sülfoksit ekleyin.
Örnekler, metabolik aktivitenin durduğu ve hücrelerin uzun süre canlı kaldığı düşük sıcaklıklarda saklanır.
Canlandırmak için, stresi azaltmak ve kademeli iyileşmeyi desteklemek için az miktarda donmuş biyokütleyi bir agar plakasına kazıyarak antibiyotik ve çizgi çizerek kullanın.
Bu yöntem, gelecekteki çalışmalar için siyanobakteriyel suşların uzun vadeli kriyo-koruması ve canlandırılmasını sağlar.
Suşları uzun vadede depolamak için, 30 ila 50 mililitre BG11 ortamına hücre dolu bir halka aşılayarak suşun taze kültürünü kurun. Kültürü üç ila dört gün boyunca 0.4 ila0.7 ile 0.7 arasında eşit OD 750'ye kadar büyütün.
Hücreleri bir kez yıkamak için BG11 kullandıktan sonra, pelleti yaklaşık iki mililitre BG11 ile yeniden süsküye alın. Bir tüpe 0,8 mililitre konsantre hücre ekleyin. Sonra %80 filtre sterilize edilmiş gliserol 0,2 mililitre ekleyin.
Başka bir tüpe 0,93 mililitre konsantre hücre ve 0,07 mililitre DMSO ekleyin. Her iki tüpü de eksik 80 derece Celsius'ta sakla. Suşları canlandırmak için, tüpü çıkarın ve antibiyotiksiz bir agar plakaya bazı hücreleri kazımak için küt uçlu bir çöp kürdanı kullanın. Sonra steril bir halka kullanarak normal şekilde çizgi çizer.