Bakteriyel Maruziyetten Sonra C. elegans'ta Bağırsak Geçirgenliğinin Değerlendirilmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 2:45 dk • March 31st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C'yi alalım. E içeren besin açısından zengin agar plakalarında yetiştirilen elegans solucanları. kontrol durumu için coli, patojen durumu için ise Pseudomonas aeruginosa.

Kuluçka sırasında, solucanlar bağırsak lümenini kolonileştiren bakterilerle beslenir.

Kontrol sisteminde, bağırsak epiteli sağlam kalırken, patojenlerden salınan toksinler epitel hasarına neden olur.

Solucanları bir tampon ile yıkayın ve floresan izleyiciler ile ısıya etkisiz bakterilerle takviye edilen tabaklara aktarın.

Kontrol sisteminde, yutulan floresan izleyiciler bağırsakta kalırken, patojenle enfekte olan solucanlarda hasar görmüş epitelden geçerek vücut boşluğuna girerler.

Solucanları tekrar yıkayın ve taze tabaklara koyun. Daha sonra bunları hücresel yapıyı korumak için bir fiksatif içeren çoklu kuyu test plakasına aktarın.

Fiksanti çıkarın. Sonra görüntüleme için bir montaj ortamı ekleyin.

Floresans görüntüleme sistemi kullanarak gözlem yapın.

P. vücut boşluğunda artan floresans. Aeruginosa'ya maruz kalma solucanları, patojenin indükleyen bağırsak geçirgenliğini gösterir.

Yaşla senkronize edilmiş L4 larvalarını S-tampon ile yıkayın ve yaklaşık 500 solucanı farklı bakteri ve kimyasalları içeren NGM plakalarına aktarın. Sonra, plakaları 20 derece Celsius sıcaklıkta 48 saat boyunca kuluçka altına alın.

FITC-dekstran takviyeli plakaları 2 mililitre ısıyla inaktive edilmiş E karıştırarak hazırlayın. coli ile birlikte dört miligram FITC-dekstran. 20 taze NGM agar tabağının her birine 100 mikrolitre karışım ekleyin ve tabakların temiz bir laboratuvar tezgahında 1 saat kurumasına izin verin. 48 saatlik tedaviden sonra, solucanları S-tampon ile yıkayıp FITC-dekstran takviyeli plakalara ve FITC-dekstransız NGM plakalarına aktarın ve plakaları gece boyunca kuluçka edin.

Ertesi gün, solucanları S-buffer ile yıkayın ve taze NGM agar tabağı içinde 1 saat boyunca sürünmelerine izin verin. Siyah 96 kuyu açıklığında, düz tabanlı bir plakanın her kuyusuna 50 mikrolitre %4 formaldehit ekleyin ve her kuyuya yaklaşık 50 solucan aktarın. 1 ila 2 dakika sonra tüm formaldehiti çıkarın ve her kuyuya 100 mikrolitre montaj ortamı ekleyin.

12:15

C. elegans bağırsak olarak bir Model hücreler arası Lumen morfogenez ve In Vivo polarize membran Biyogenez tek hücre düzeyinde için: etiketleme antikor boyama, işlev RNAi kaybı çözümleme ve görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:58

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:58

Caenorhabditis elegans Bağırsaklarında Mikrobiyal Kolonizasyon ve Enfeksiyonu Görselleştirmek için RNA Floresan in situ Hibridizasyon (FISH)

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:56

FITC-Dekstran Besleme: C. elegans'ta Bağırsak Geçirgenliğini Ölçmek İçin Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:22

Mikropsuz C. elegans'de Bağırsak Bakteri Kolonizasyonunun Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:04

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:58

Deneysel Kolit sırasında Bağırsak epitel Bariyer Fonksiyonları Üzerine Ek Beslenme Faydalı Etkileri Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:22

Vitro ve In Vivo yaklaşımlar Bağırsak epitel hücre geçirgenliği belirlemek için

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:23

Bakteri ve Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Bağırsak Geçirgenliği Üzerine Etkilerinin Ölçülmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:32

İntravital Mikroskopi Tabanlı Bir Yaklaşım Bağırsak Geçirgenliği ve Epitel Hücre Dökülme Performansını Değerlendirmek için

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026