Name: Koklear İç Saç Hücreleri Ulaşın Afferent Dendritler postsinaptik Kayıtlar: Şerit Synapse Multivesicular Yayın İzleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-10T16:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 45 s
Description: Öğrenin, memeli kokleasında iç saç hücreleri aferent sinapslarında postsinaptik aktiviteyi kaydetmek için whole-cell patch-clamp tekniğini. Bu yöntem işitsel sinir iletimini incelemek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma EY Sağırlık Araştırma Vakfı Araştırma Fonu tarafından desteklenen ve NIDCD DC005211 İşitme ve Denge Merkezi, Johns Hopkins Üniversitesi EG ve DC006476 NIDCD oldu. Artwork telif hakkı Tim Phelps, Johns Hopkins Üniversitesi. LG, ilk el yazması yazdı, EY ve LG diseksiyonu ve kayıt çekildi. Tüm yazarlar timsalimiz rakamlar ve yazının yazma katkıda bulunmuştur.

<ol><li>Glowatzki, E., Fuchs, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmitter+release+at+the+hair+cell+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Transmitter release at the hair cell ribbon synapse.</a> Nat Neurosci. 5 (2), 147-154 (2002).</li>
<li>Goutman, J. D., Glowatzki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+and+calcium+dependence+of+transmitter+release+at+a+single+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Time course and calcium dependence of transmitter release at a single ribbon synapse.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (41), 16341-16346 (2007).</li>
<li>Yi, E., Roux, I., Glowatzki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+HCN+channels+shape+excitatory+postsynaptic+potentials+at+the+inner+hair+cell+afferent+synapse+in+the+mammalian+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Dendritic HCN channels shape excitatory postsynaptic potentials at the inner hair cell afferent synapse in the mammalian cochlea.</a> J Neurophysiol. 103 (5), 2532-2543 (2010).</li>
<li>Grant, L., Yi, E., Glowatzki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+modes+of+release+shape+the+postsynaptic+response+at+the+inner+hair+cell+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Two modes of release shape the postsynaptic response at the inner hair cell ribbon synapse.</a> J Neurosci. 30 (12), 4210-4220 (2010).</li>
<li>LoGiudice, L., Matthews, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ribbons+at+sensory+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscientist%22%5BJournal%5D)">The role of ribbons at sensory synapses.</a> Neuroscientist. 15 (4), 380-391 (2009).</li>
<li>Singer, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+multivesicular+release+at+a+mammalian+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Coordinated multivesicular release at a mammalian ribbon synapse.</a> Nat Neurosci. 7 (8), 826-833 (2004).</li>
<li>Keen, E. C., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+characteristics+of+the+hair+cell%27s+afferent+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Transfer characteristics of the hair cell's afferent synapse.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (14), 5537-5542 (2006).</li>
<li>Li, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unitary+event+underlying+multiquantal+EPSCs+at+a+hair+cell%27s+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The unitary event underlying multiquantal EPSCs at a hair cell's ribbon synapse.</a> J Neurosci. 29 (23), 7558-7568 (2009).</li>
<li>Singer, J. H., Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicle+depletion+and+synaptic+depression+at+a+mammalian+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Vesicle depletion and synaptic depression at a mammalian ribbon synapse.</a> J Neurophysiol. 95 (5), 3191-3198 (2006).</li>
<li>Suryanarayanan, A., Slaughter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+transmission+mediated+by+internal+calcium+stores+in+rod+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic transmission mediated by internal calcium stores in rod photoreceptors.</a> J Neurosci. 26 (6), 1759-1766 (2006).</li>
<li>Neef, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+the+mechanism+of+exocytosis+at+the+hair+cell+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Probing the mechanism of exocytosis at the hair cell ribbon synapse.</a> J Neurosci. 27 (47), 12933-12944 (2007).</li>
<li>Tritsch, N. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+spontaneous+activity+in+the+developing+auditory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The origin of spontaneous activity in the developing auditory system.</a> Nature. 450 (7166), 50-55 (2007).</li>
<li>Kros, C. J., Ruppersberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+a+potassium+current+in+inner+hair+cells+during+development+of+hearing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Expression of a potassium current in inner hair cells during development of hearing in mice.</a> Nature. 394 (6690), 281-284 (1998).</li>
<li>Muller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+of+frequency+representation+in+the+rat+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Developmental changes of frequency representation in the rat cochlea.</a> Hear Res. 56 (1-2), 1-7 (1991).</li>
<li>Seal, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorineural+deafness+and+seizures+in+mice+lacking+vesicular+glutamate+transporter+3%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Sensorineural deafness and seizures in mice lacking vesicular glutamate transporter 3.</a> Neuron. 57 (2), 263-275 (2008).</li>
</ol>

Bu yordamın kritik adım diseksiyonu. Doku diseksiyonu sırasında uzatılmış veya bozuksa, afferent liflerin hayatta olmaz. Genç sıçanların Doku daha esnek ve bağışlayıcı. Biz doğum sonrası 10 ila 11 gün incelemek için kolay ve deneyler daha yüksek başarı oranlarına sahip olduğunu bulabilirsiniz. Önemli bir derecede koklear olgunlaşma 12 14 postnatal günde dört bir yanından gelen duymak başlayan sıçanlarda, postnatal dönemde oluşur. Bu nedenle, yaş diseksiyonu kolay olduğu, sinaps 4 tam olgun olmayabilir. Sıçanlar için burada açıklanan diseksiyonu aslında fare, fare koklea daha küçük boyutta olan temel fark için aynıdır. Bu teknik transgenically değiştirilmiş fareler 15 incelenmek üzere şerit sinapsların özellikleri sağlar. Bu tekniğin daha fazla değişiklikler şunlardır: floresan boya etiket lifleri 3 hücre içi bir çözüm ekleyerek; presinaptik iç saç hücresi ve postsinaptik afferent bouton ile eşleştirilmiş kayıtları, pre ve post sinaptik hücreleri arasındaki transfer fonksiyonu 2 belirlenecek sağlayan ve gevşek afferent BOUTONS ekstrasellüler kayıtları hücresel bütünlük kaybını önlemek için mühür. Ekstraselüler kayıt yapılandırma ulaşmak için bütün hücre yapılandırması daha kolaydır ve deneyler genellikle daha uzun ömürlü.

Yukarıda afferent terminalleri kayıt için kullanılan elektrofizyolojik kurulumları ekipman.

koklear İç saç hücreleri ulaşın afferent dendritler postsinaptik kayıtlar: Şerit synapse multivesicular yayın İzleme

Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse

Iç saç hücresi (İHK) ve işitsel sinir lifi arasındaki afferent sinaps tek bir şerit sinaps 1-4 postsinaptik aktivite kayıt için elektrofizyolojik erişilebilir bir site sağlar. Şerit duyu hücreleri sinaps sürekli nörotransmitter serbest IHC membran potansiyeli 5 kademeli değişikliklere yanıt olarak modüle oranı. Şerit sinaps genlikleri 1, 4, 6-11 değişen eksitatör postsinaptik akımlar (EPSCs) uyandırmak için aynı anda birden fazla veziküller serbest olabilir multivesicular açıklaması, faaliyet gösterilmiştir . Presinaptik şerit, ne multivesicular serbest altında yatan mekanizma rol şu anda iyi anlaşılır ne. IHC 10-20 işitsel sinir lifleri, tek bir şerit sinaps oluşturmak için biten bir miyelinsiz tek ve her fiber iletişim IHC tarafından innerve. Afferent BOUTONS iletişime IHCs (çapı yaklaşık 1 mikron) küçük boyutlu, kayıtları yapılacak olağanüstü temporal çözünürlük sağlar. Ayrıca, teknik sinaps transfer fonksiyonu doğrudan 2 incelenecektir sağlayan, hem de pre-ve postsinaptik hücreler aynı anda kayıt için adapte edilebilir . Bu yöntem, bu nedenle multivesicular serbest bırakma, duyu hücreleri şerit zor fonksiyonu, sinir iletiminin temel yönlerini ele olabilir hangi bir araç sağlar.

Memeli koklea iç saç hücresi şerit sinaps işitsel sinir lifi dendritler Tüm hücre yama klemp kayıtları.

Koklear İç Saç Hücreleri Ulaşın Afferent Dendritler postsinaptik Kayıtlar: Şerit Synapse Multivesicular Yayın İzleme

İç kıl hücrele (IHC) ile işitsel sinir lifi arasındaki afferent sinaps, ... kaydı için elektrofizyolojik olarak erişilebilir bir bölge sağlar.

Bu prosedürün genel amacı, iç tüy hücresi aferent sinapslarındaki post-sinaptik aktiviteyi kaydetmektir. Bu işlem, öncelikle başı kesilmiş bir sıçandan yeni çıkarılmış bir kokleanın duyusal epitelinin açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, eksize edilmiş apikal kısmın modifiye bir lamel üzerine yerleştirilmesi ve kayıt haznesine aktarılmasıdır.Prosedürün üçüncü adımı, kayıt elektroduna sahip bir aferent batonu belirlemek ve ona erişim sağlamaktır. Prosedürün son adımı ise, patch clamp tekniğinin tüm hücre konfigürasyonunu oluşturmak için aferent fiber membranına sıkı bir sızdırmazlık sağlamak ve ardından membranı yırtmaktır. Nihayetinde, tüm hücre patch clamp elektrofizyolojisi aracılığıyla tek bir şerit sinapsından gelen post-sinaptik olaylar veya potansiyelleri gösteren sonuçlar elde edilebilir.Koklear dokunun diseksiyonu ve hazırlanması öğrenilmesi zor olduğundan ve küçük aferent lifleri tanımak ve onlara erişmek güç olduğundan, bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir. Diseksiyona başlamadan önce, kayıtlar sırasında preparatı yerinde tutacak modifiye edilmiş bir lameli hazırlayın. Sekiz ila 12 milimetrelik dairesel bir cam lamel kullanarak, lamelin kenarına doğru bir damla yarı kürlenmiş syl guard uygulayın.İnce bir böcek iğnesinin kalın ucunu lamelin üzerine yerleştirin. Böcek iğnesini cama sıkıca bastırın. Pens yardımıyla, sabitlemek için sill koruyucuyu ısıtılmış bir bobine karşı ısıtın.Eşlik eden metinde açıklandığı şekilde 10 ila 20 mikro elektrot hazırlayın. Mikro forge ile ateşle cilalama işleminden sonra, mikro elektrodun dış uç çapı yaklaşık bir mikron olmalıdır. Üç haftalık bir sıçanın anesteziye alınması ve kafasının kesilmesinin ardından, pipet duvarının nihai kalınlığı yaklaşık bir mikrometre'nin üçte birine eşittir.Diseksiyona deriyi çıkararak başlayın, baş kısmını diseke edin ve beyni çıkarın. Temporal kemiği açığa çıkarmak için her iki temporal kemiği de çıkarın. Her bir temporal kemiği, standart hücre dışı solüsyon içeren temiz bir diseksiyon kabına yerleştirin. Bir sonraki adım, kokleayı açığa çıkarmak için temporal kemiği çevreleyen kemik kısmını çıkarmaktır.Temporal kemiği tabanından bir pensle güvenli bir şekilde tutun. Round ve oval pencereleri ve kohleayı tanımlayın. Oval pencere ve kohleanın sarmal tarafı yukarı bakacak şekilde kohleayı yönlendirin.Kokleanın etrafındaki fazla kemiği temizleyin. Kemiğin geri kalanından daha şeffaf olan bölgeden başlayarak, kemiği doğrudan kokleanın üzerinden yongalamak için ikinci bir ince pens kullanın. Bu bölgede kemik daha ince olduğundan temizlenmesi daha kolaydır.Apikal kıvrımın etrafındaki kemiği çıkarmaya devam edin. Apikal kıvrımın altındaki modiolusu kesmek için mikro disseksiyon makası kullanın. Ardından, apikal kıvrımı kohleanın alt kıvrımlarından ayırın.Apikal sarmalı korumaya özen gösterin. Çekilmemeli veya gerilmemelidir. Son olarak, dokuyu çok fazla yırtmadan apikal dönüşü kokleadan çıkarın.Kalan kemiği çıkarmak için ince pens kullanın. Bir sonraki adım, STR of oculis ve tial membranı çıkarmaktır. Tüy hücresi bölgesinin dışında yer alan parlak doku şeridi olan STR of oculis'i dikkatlice çıkarın.Oculis STR ile birlikte kolayca yerinden ayrılabilecek olan duyusal tüy hücrelerini çıkarmamaya dikkat edin. Ardından, tial membranı ayırmak için ince pens kullanın. Duyusal tüy hücrelerinin üzerinde yer alan parlak, yarı saydam membrandır; şimdi fazla doku ve kemiği kesin ve preparatı pensle düzleştirin.Bu, dokunun bir iğne altına eşit şekilde yerleştirilebilmesi için gereklidir. Diseksiyon işlemi şimdi tamamlanmıştır. Hazırlanan lamelin üzerindeki iğnenin altına, diseksiyon tamamlandıktan sonra iğnenin tüy hücrelerinden uzakta konumlandığına dikkat ederek preparatı yerleştirin.Koklear dokuyu tutan lam üzerindeki ekstraselüler sıvı damlasını koruyarak, preparatı pens yardımıyla kayıt odasına aktarın ve hemen ekstraselüler solüsyon ile perfüzyona başlayın. Preparatın daha iyi hayatta kalmasını sağlamak için mikroskobun 10 x objektifini veya 40 x su daldırmalı DIC objektifini kullanın. Preparatı konumlandırmak için, kayıt elektrotlarının iç tüy hücrelerine lateral duvarlarına dik bir açıyla yaklaşabileceği şekilde yönlendirin.Preparatın kıvrılmış olması nedeniyle iç tüy hücrelerinin bazal bölgesinin görünürlüğü kısıtlıysa, preparatın dış kenarını cam lamelin üzerine doğru bastırmak için bir kayıt elektrodu kullanın. Bu sırada iç tüy hücrelerinin kendisine baskı yapmamaya özen gösterin. Bu preparatta, üstteki elektrot preparatın dış kenarını aşağıda tutarken, alttaki elektrot afferent batonların bulunduğu yeri işaretlemektedir.Referans olarak, NC 70 Nuv Con kamerası, iç tüy hücresi bölgesindeki dokunun sağlıklı olup olmadığını değerlendirmek için monitörde büyütülmüş Forex görüntüsünü görüntüler. Referans noktası olarak tüy demetlerini bulun ve çekirdekleri bulmak için odağı aşağıya kaydırın. Odağı, aferent uçlarıyla birlikte iç tüy hücrelerinin tabanına doğru daha da aşağıya, ardından monitörde çekirdeklerin seviyesine ulaşana kadar tekrar yukarıya kaydırın.Şimdi iç tüy hücrelerinin tabanı etrafındaki afferent batonları bulun. Batonlar küresel veya elipsoid şekillidir, çapları yaklaşık bir mikrondur, açık renklidirler ve parlak bir görünüme sahiptirler. Odaklamayı yukarı ve aşağı hareket ettirerek onları bulabilirsiniz.Bir sonraki adım, uç kısmı hücre içi solüsyonla doldurulmuş bir mikron uçlu bir kayıt elektrodu kullanarak afferent liflere giden yolu açmaktır. Pozitif basınç uygulayın ve elektrodu preparata yönlendirmek için mikro manipülatörü kullanın. Preparasyondaki iç tüy hücresi tabanı seviyesinde bir insizyon yapmak için bu elektrodu kullanın.Pozitif basınç kullanarak, destek hücrelerinin ince tabakası ile iç tüy hücreleri arasına elektrodu iterek, iç tüy hücrelerinin tabanındaki bölgeye erişim yolu oluşturun. Elektrodu dikkatlice çıkarın ve yerine hücre içi çözelti ile doldurulmuş, bir mikron uç çapına sahip yeni bir elektrot yerleştirin. Elektrot ucunun temiz kalmasını sağlamak için pozitif basınç uygulayarak, kayıt elektrodunu erişim deliği üzerinden bitişik destek hücrelerinin etrafından afferent baton yönüne doğru ilerletin.Elektrot ucunun doğrudan afferent butonun önünde olduğundan emin olun; butonlar, pipet hareketine karşı destek hücrelerinden ve iç tüy hücresi membranından daha fazla direnç gösterir. Pipet hareket ettirilirken bu fark hissedilebilir; butonun hareket ettiğinden emin olmak için pipeti yukarı aşağı hareket ettirin ve itin. Bu durum, pipet ucunun ve butonun, elektrot afferent butona bastırılmış haldeyken aynı odak düzleminde olduğunu gösterir. Eş zamanlı olarak pozitif basıncı serbest bırakın ve giga ohm sızdırmazlık oluşturmak için vakum uygulayın.Tam hücre kaydı elde etmek için elektrot içindeki membranı yırtmak amacıyla hafif vakum darbeleri uygulayın. Eğer patch yapılan hücre bir afferent baton ise, tam hücre kayıt modunda küçük kapasitif geçici akımlar (transientler) gözlemlenir. Bu şekil, bir afferent fiberden kaydedilen tipik geçici akımı göstermektedir.Sinaptik aktivite kaydına başlayın. Afferent fiber spontan aktivite göstermiyorsa, daha yüksek potasyum konsantrasyonuna sahip bir ekstraselüler solüsyon uygulayarak tüy hücresini depolarize edin. Bu şekil, solda AFF fiberleri ve sağda iç tüy hücreleri için tipik akım-voltaj ilişkilerini göstermektedir.Akım-gerilim ilişkileri, -124 mV'den +36 mV'ye kadar 10 mV'lik artışlarla uygulanan gerilim basamakları ve -84 mV'lik bir tutma potansiyeli ile kaydedilmiştir. Gerilimler, bir afferent fiberden gelen akım-gerilim ilişkilerine odaklanan bazı izlerin sağında gösterilmiştir. Uyarıcı post-sinaptik olayların veya EPC'lerin gerilim basamaklarının çoğunda mevcut olduğuna dikkat edin.EPC'ler yaklaşık pozitif 6 mV değerinde pozitife döndü. Bu kayıt, voltaj kapılı sodyum akımlarını engellemek için tetrodotoksin varlığında gerçekleştirildi; engelleyici olmasaydı, kayıtta ek olarak hızlı aktive olan sodyum içe akımları da görülürdü ve bu durum kaydın bir afferent fiber kaydı olduğunu kanıtlardı. Hiperpolarize voltajlardaki yavaş aktive olan içe akıma dikkat ediniz.Bu akım, iç tüy hücrelerinde veya destek hücrelerinde bulunmaz ve kaydın bir aferent fiberden yapıldığının iyi bir göstergesidir. Bu kayıtlar, bir iç tüy hücresi için akım-voltaj ilişkilerini göstermektedir. Ok, pozitif potansiyellerdeki hızlı aktive olan dış potasyum akımlarını göstermektedir.Bunları, dar pipet çapı ve yüksek erişim direnci nedeniyle gecikmiş doğrultucu potasyum akımları takip eder. Burada gösterilen iç tüy hücresi akımları, iç tüy hücresi akımlarının doğru kayıtlarının alınması için beklenen değerden daha küçüktür. Daha düşük erişim direncine sahip pipetler kullanılmalıdır.Buna rağmen, burada sunulan kayıtlar, iç tüy hücreleri ile afferent fiberlerin akım-voltaj ilişkilerinin net bir şekilde ayırt edilebileceğini göstermektedir. Bu şekil, bir afferent fiberden kaydedilen sinaptik akımları göstermektedir. EPC'lerin değişken boyut ve şekillerine dikkat ediniz.Kayıtlar, voltaj kapılı sodyum akımlarını bloke etmek için tetrodotoksin uygulanarak oda sıcaklığında gerçekleştirilmiştir. Bu şekil, bir iç tüy hücresi ve onunla temas halindeki bir aferent batondan alınan eş zamanlı kayıtları göstermektedir. İç tüy hücresini depolarize etmek için bir voltaj basamağı kullanılmış ve buna yanıt olarak iç tüy hücresinden içeri doğru kalsiyum akımları kaydedilmiştir; kalsiyum girişi, nörotransmitter salınımına yol açarak aferent batondaki EPC'leri aktive eder.Bu prosedürü uygulamaya çalışırken, 50 milisaniyelik iç tüy hücresi depolarizasyonu sırasında ortaya çıkan sinaptik depresyona dikkat edin. Koklear dokuyu diseke ederken ve hazırlarken özen göstermenin; afferent terminallerden kayıt almaya çalışırken sabırlı ve iyimser kalmanın önemli olduğunu unutmayın.

postsynaptic-recordings-at-afferent-dendrites-contacting-cochlear

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Burada elektrofizyoloji ve Ca2 + görüntüleme için uygun agar-gömülü retina dilim hazırlanması için bir protokol. Bu yöntem, tek presinaptik sinir uçları doğrudan patch-klemp kayıtları kullanarak retina mikrodevreler şerit-tip sinaps bir çalışma sağlar.

Patch-kelepçe Kapasitans Ölçümler ve Ca 2 + Retina Dilimleri Tek Sinir Terminalleri Görüntüleme

Bu video, bir fare kulak kepçesinin kıl foliküllerinde mekanik olarak uyarılmış afferent çıktı ve sinir terminali etiketlemesinin birleşik kaydını göstermektedir. Bir floresan membran boyasına maruz kalmadan önce ve sonra saç folikülü sinir terminallerinin mekanik stimülasyonu, üretilen aksiyon potansiyellerinin elektrofizyoloji kaydı ve saç foliküllerindeki sinir terminali etiketlemesinin görselleştirilmesi ile ilgili adımları ana hatlarıyla belirtir.

Fare kılı foliküllerinde mekanik olarak uyarılmış afferent çıktının ve sinir terminali etiketlemesinin birleşik kaydı

Bu videoda, fare kokleasının belirli bölgelerindeki şerit sinapslarını değerlendirmek için bir yöntem gösterilmektedir. Her koklear dönüşte farklı frekans bölgelerindeki fonksiyonel sinapsları tanımlamak için immün boyama ve konfokal görüntüleme tekniklerini kullanır.

Fare Kokleasının Belirli Frekans Bölgelerinde Şerit Sinapslarının Değerlendirilmesi

Fare kulağı derisi kıl foliküllerini innerve eden palisade uçlarının mızrak şeklinde terminallerinin mekanik stimülasyonuna bağlı afferent deşarjı kaydetmek için basit ve yeni bir teknik sunulmuştur.

Fare Saç Folikül hançer Endings de Mekanik Uyarılmış Afferent Çıkışı ve Sinir Terminali Etiketleme Kombine Kaydı

Sinaptik akımları, Drosophila Üçüncü INSTAR larva nöromüsküler kavşak görüntülenmeyecektir sinaptik boutons üzerinden focally kaydedilebilir. Bu teknik, tek bir sinaptik bouton etkinliğini izleme sağlar.

Drosophila larva nöromüsküler kavşak sinaptik akımlardan Fokal Macropatch kayıtları

Bu iletişim kuralı İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi postnatal fare pups üzerinden kaydetmek için yöntemler açıklanır. Dış saç hücreleri fonksiyonel gelişimi incelemek için tüm hücreli yama kelepçe dış saç hücreleri izole kayıt deneysel işlemin adım adım açıklanmıştır.

İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt Doğum sonrası sıçanlarda

Bu yazıda normal farelerde morfolojik özellikleri ve kurdele sinüslerinin fonksiyonel durumunu değerlendirmek için deneysel bir protokol açıklanmaktadır. Bu model aynı zamanda gürültüye bağlı ve yaşa bağlı Cochlear synaptopathy-kısıtlanmış modeller için de uygundur. Önceki fare çalışmalarından gelen göreli sonuçlar da tartışılmaktadır.

Fare koklea belirli frekans bölgelerinde şerit synapses morfolojik ve fonksiyonel değerlendirilmesi

Burada, fonksiyonel mekanotransdüksiyon kanalları ile işitsel saç hücrelerinde 3 kDa Texas Kırmızı etiketli dextran alımını görselleştirmek için bir yöntem salıyoruz. Buna ek olarak, 3-10 kDa dekstrans saç endositoz ve Corti organının destekleyici hücreleri çalışmak için kullanılabilir.

Canlı ve Fonksiyonel Murine Koklear Saç Hücrelerinde Dekstran Etiketleme ve Alımı

Genç erişkin ve yaşlı gerbil kokleae'lerin afferent sinaptik yapıların ve saç hücrelerinin immüno-etiketlenmesi, yaşlı dokudaki otofloresansın söndürülmesi, kokleae'nin uzunluğunun diseksiyonu ve tahmin edilmesi ve konfokal görüntüleme ile elde edilen görüntü yığınlarındaki sinapsların nicelleştirilmesi için bir protokol sunulmaktadır.

Genç Yetişkin ve Yaşlı Gerbil Cochleae'de İmmünoetiketleme ve Şerit Sinapslarının Sayılması

Burada, iç kulağın vestibüler ganglion ve spiral ganglion nöronlarından diseksiyon, ayrıştırma, kültürleme ve yama-klemp kaydı için ayrıntılı talimatlar sağlayan yöntemler sunulmaktadır.

Patch-Clamp Kayıtları için Yenidoğan Kemirgenlerinden Vestibüler ve Spiral Ganglion Somata'nın İzole Edilmesi ve Kültürlenmesi

Öğrenin, memeli kokleasında iç saç hücreleri aferent sinapslarında postsinaptik aktiviteyi kaydetmek için whole-cell patch-clamp tekniğini. Bu yöntem işitsel sinir iletimini incelemek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

Koklear İç Saç Hücreleri Ulaşın Afferent Dendritler postsinaptik Kayıtlar: Şerit Synapse Multivesicular Yayın İzleme

Daha fazla video keşfet