Rekombinant Hepatit B Virüs Partiküllerinin Üretimi ve Saflaştırılması

Kollajen kaplı bir kapta kültüre edilmiş hepatositlerle başlayın.

İkisini içeren bir transfeksiyon reaktifi kompleksi ekleyin: biri modifiye bir Hepatit B Virüsü veya HBV genomu taşıyan, diğeri ise viral yapısal proteinleri kodlayan iki plazmid.

Plazmid girişine izin vermek için inkübe edin. Hücre içinde, yapısal proteinlerin ve modifiye edilmiş bir HBV genomunun üretilmesi için viral genler eksprese edilir; bunlar birleşerek rekombinant HBV partiküllerini oluşturur.

Viral partikül üretimini ve salınımını desteklemek için besiyerini değiştirin ve inkübe edin.

Besiyerini toplayın ve kalıntıları çöktürmek için santrifüjleyin.

Süpernatanı toplayın ve kalan döküntüleri uzaklaştırmak için filtreleyin.

Ardından, viral partikülleri çöktürmek için polietilen glikol ve sodyum klorür ekleyin.

İçerikleri çöktürmek için santrifüjleyin. Çökelti tamponda çözün ve kalıntıları çöktürün. Ardından, bunu bir sükroz yastığı üzerine katmanlayın.

Viral partikülleri yastık katmanından çöktürmek için ultrasantrifüj uygulayın.

Süpernatantı uzaklaştırın ve peleti besiyerinde yeniden süspanse edin.

Süspansiyonu filtreleyin ve saflaştırılmış rekombinant HBV'yi sonraki analizler için düşük sıcaklıkta saklayın.

Hücre kült