JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:29 dk • August 31st, 2026
Viral enfeksiyona duyarlı olan erken evre sivrisinek larvalarını alın.
Larvaları deiyonize su içeren bir behere aktarın.
Hedef larva genlerini baskılayan bir mikroRNA kodlayacak şekilde tasarlanmış rekombinant densovirus uygulayın. İnkübe edin.
Larvalar virüsü bünyelerine alır ve virüs daha sonra bağırsağa ulaşır.
Yutulan virüs, bağırsak epitelyumunu geçer ve diğer dokulara yayılır.
Virüs, endositoz yoluyla larva hücrelerine girer ve DNA'sını çekirdeğe salar.
Viral DNA, mikroRNA'lar üretir.
Sitoplazmada, bu mikroRNA'lar RNA-indüklemeli susturma kompleksine bağlanır.
Kompleks, tamamlayıcı hedef larva mRNA'larına bağlanır ve bunları parçalayarak ekspresyonu önler ve gen susturulmasına yol açar.
İnkübasyondan sonra, yutulmamış viral partikülleri uzaklaştırmak için larvaları deiyonize su ile yıkayın.
Larvaları toparlanmaları için besin içeren taze bir plakaya aktarın.
Hedef geni susturulmuş, virüsle enfekte edilmiş sivrisinek larvaları, sonraki uygulamalar için hazırdır.
100 adet birinci instarlar A. albopictus larvasını deiyonize su kullanarak üç kez yıkayın. Ardından, larvaları 95 mililitre deiyonize su içeren bir behere aktarın.
Beş mililitre rAaeDV stok ekleyin ve larvaları 28 °C'de 24 saat boyunca inkübe edin. Larva enfeksiyonunun başarısı için, yüksek enfeksiyon oranları sağlamak amacıyla larvaların 24 ila 36 saat boyunca enfekte edici virüs partikülleri ile birlikte tutulması esastır. İnkübasyonun ardından, larvaları deiyonize su kullanarak üç kez yıkayın ve ardından larvaları tekrar plakalara aktarın. Larvaları düzenli olarak besleyin.