JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:14 dk • July 31st, 2026
Start with a cuvette containing a purified, monodisperse suspension of virus-like particles in a buffer.
These particles contain the capsid, the protein shell of a virus, but they lack genetic material, making them non-infectious.
Place the cuvette in a dynamic light scattering (DLS) instrument that has been preheated to a target temperature.
Allow the sample to equilibrate briefly, then begin the measurements.
Heating causes the capsid proteins to denature. This structural change exposes hydrophobic regions that promote particle clustering and aggregation.
DLS directs a laser beam through the suspension and measures fluctuations in the scattered light caused by particle motion.
Smaller particles move faster and produce rapid fluctuations in the scattered light, while larger aggregates move more slowly and cause slower fluctuations.
DLS analyzes these fluctuations at regular intervals to track the particle aggregation in real time.
Create a new size standard operating procedure in the DLS instrument software as detailed in the text protocol. Select the run arrow within the software to open and name a new sample and allow the instrument to reach the temperature equilibrium.
Transfer the VLP suspension to a small volume quartz cuvette, avoid bubbles, and pipette slowly against the wall of the cuvette. After the instrument has reached temperature equilibrium, insert the cuvette into the sample chamber. After waiting 10 seconds for the sample temperature to equilibrate, start the run and simultaneously start a timer.
Stop the timer at the end of the first measurement. Take this time as the first time point. Obtain subsequent time points from the measurement times recorded by the software.
Bu makale, dinamik ışık saçılması (DLS) kullanarak virüs benzeri parçacıkların (VLP'ler) ısı kaynaklı agregasyonunu izleyerek viral kapsidlerin yapısal bütünlüğünü değerlendirmek için bir in vitro protokol sunmaktadır. Bu yöntem, protein denatürasyonu sonucunda meydana gelen parçacık agregasyonunun gerçek zamanlı olarak takip edilmesini sağlayarak, termal stres altında kapsid stabilitesine dair bilgiler sunar.
Dinamik ışık saçılması (DLS), virüs benzeri partikül (VLP) agregasyonunun gerçek zamanlı ve kantitatif değerlendirmesine olanak tanıyarak, erken biyofarma Ar-Ge süreçlerinde kapsid stabilitesi ve formülasyon dayanıklılığı hakkında doğrudan bilgi sağlar. Bu yaklaşım, VLP tabanlı terapötiklerin ve aşıların yapısal bütünlüğüne dair öngörülebilir bir güven sağlayarak, kritik keşif ve preklinik dönüm noktalarındaki riskleri azaltır. DLS tabanlı agregasyon takibinin entegrasyonu, aday maddelerin stres koşulları altındaki stabilitesine dair uygulanabilir veriler sunarak portföy karar verme süreçlerini iyileştirir.
DLS tabanlı agregasyon takibi, erken dönem kapsid doğrulaması ile VLP tabanlı ürünler için formülasyon optimizasyonu arasında köprü kurarak, keşiften preklinik aşamaya kadar uzanan sürekliliğe uyum sağlar.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026