JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:24 dk. • August 31st, 2026
Genetik materyal içermeyen virüs benzeri partiküller olan viral kapsidleri içeren tüpleri alın.
Tüpleri sabit bir sıcaklıkta farklı süreler boyunca ısıtın.
Daha kısa bir ısıtma süresi kapsid proteinlerini hafifçe strese sokarken, uzatılmış ısıtma kapsidi bozar ve agregasyona neden olur.
Daha fazla yapısal değişikliği önlemek için tüpleri hızla soğutun.
Sıvıyı bir parafin film üzerine aktarın.
Bir transmisyon elektron mikroskopisi (TEM) ızgarasını damlanın üzerine yerleştirin. Kapsidlerin ızgara yüzeyine tutunmasını sağlayın.
Fazla sıvıyı uzaklaştırmak için ızgarayı bir filtre kağıdıyla emdirin.
Gevşek şekilde tutunmuş kapsidleri uzaklaştırmak için bir tamponla yıkayın, ardından ızgarayı tekrar kurulayın.
Kapsid yüzeyine bağlanan ve onların TEM altında daha koyu görünmesini sağlayan bir ağır metal boyası olan uranil asetat içine daldırın.
Izgarayı kurutun ve bir plakaya yerleştirin. Nemi gidermek için plakayı bir desikatörde saklayın.
Isı kaynaklı kapsid hasarını görselleştirmek için ızgarayı TEM kullanarak görüntüleyin.
10 millimolar HEPES, pH 7,4 yerine PBS kullanarak ve işlemden sonra kapsidleri daha fazla seyreltmeyerek daha önce olduğu gibi ısıtma işlemini gerçekleştirin. Ardından, işlem
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin