Lentiviral Vektörler Kullanılarak Fare İntestinal Organoidlerine Gen Aktarımı

Lentiviral transdüksiyonu kolaylaştırmak için kısmen disosiye edilmiş fare intestinal organoidleri ile başlayın.

Transdüksiyon ortamındaki lentiviral vektörleri alın.

Lentivirüs, konak genomuna stabil entegrasyon için ilgilenilen bir geni taşır.

Lentivirüsü kuyucuğa ekleyin.

Viral girişine izin vermek için karışımı inkübe edin.

Viral RNA, DNA'ya tersine transcribe edilir ve konak genomuna entegre olur.

Organoid medyumu ekleyin ve karışımı bir tüpe aktarın.

Bağlanmamış virüsleri uzaklaştırmak için santrifüjleyin.

Peleti bir bazal membran matrisi içinde karıştırın.

Organoidleri bir kuyucuğa yerleştirin ve katılaşmalarına izin verin.

Matriks, organoidleri hapseden ve yapısal destek sağlayan bir ağ oluşturur.

Organoid proliferasyonunu desteklemek için büyüme faktörleri ile takviye edilmiş organoid medyumu ekleyin.

Bu işlem, transduce edilmiş geni içeren ve daha ileri fonksiyonel analizler için kullanılabilecek tomurcuklanan organoidlerin oluşmasıyla sonuçlanır.

Bu son küçük miktardaki ortam içindeki organoidleri 48 kuyucuklu bir plakanın bir kuyucuğuna aktarın.

Transdüksiyon ortamında önceden hazırlanmış yüksek titreli lentivirüsü organoidlere ekleyin ve resüspande edin. Transdüksiyonun gerçekleşmes