Enfekte İnsan Lenfositlerinde Viral Nükleik Asitlerin ve Proteinlerin Çoklu Floresan Görüntülemesi

Bir lam üzerine monte edilmiş lamelde bulunan, HIV-1 ile enfekte edilmiş insan lenfositleri ile başlayın.

Bu hücreler, viral RNA ve proviral DNA'yı floresanla işaretleyen problarla hibridize edilmiştir.

Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için hücreleri bir bloklama çözeltisi içinde inkübe edin.

HIV-1 kapsid proteinini hedefleyen primer antikorları ekleyin.

Primer antikorların kapsid proteinine bağlanmasını sağlamak için inkübe edin.

Bağlanmamış antikorları uzaklaştırmak için hücreleri tamponla yıkayın.

Primer antikorlara bağlanan floresan işaretli sekonder antikorları ekleyin.

Bağlanmamış antikorları yıkayarak uzaklaştırın.

Hücre çekirdeklerini boyamak için DNA-spesifik bir boya ekleyin, ardından fazla boyayı uzaklaştırmak için yıkayın.

Viral DNA, RNA, protein ve konak hücre çekirdeklerini farklı renklerde eş zamanlı olarak tespit etmek için çoklu floresan görüntüleme kullanın.

Bu tek hücreli görselleştirme, enfekte hücrelerde viral DNA, RNA ve proteinlerin eş zamanlı olarak görüntülenmesi yoluyla viral yaşam döngüsünün farklı aşamalarının incelenmesine olanak tanır.

İlgilenilen proteinlerin immünboyaması için, son yıkamanın ardından, her bir lamelin oda sıcaklığında bir saatlik i