Prototip Köpük Virüsü İntazomlarının Boyut Dışlama Kromatografisi ile Saflaştırılması

Prototip köpüklü virüs veya PFV intasom çökelekleri, monomerik integrazlar, DNA oligomerleri ve protein agregatları içeren bir süspansiyon ile başlayın.

PFV intasomları, viral genomik DNA'yı taklit eden sentetik oligomerlerle kompleks oluşturmuş viral integraz tetramerleridir.

Süspansiyona bir tuz çözeltisi ekleyin ve buz üzerinde inkübe edin. Tuz, intasomlar arasındaki elektrostatik etkileşimi azaltarak çökeleklerin çözünmesini sağlar.

İntazom çözünürlüğünü artırmak için düzenli aralıklarla nazikçe pipetleme yapın.

Kalan çökelteyi pelletlemek için santrifüjleyin ve çözünür intasomları içeren süpernatanı toplayın.

Çapraz bağlı agaroz boncuklarla doldurulmuş, önceden dengelenmiş bir boyut dışlama kromatografisi kolonunu alın ve süpernatantı kolona yükleyin.

Büyük boyutları nedeniyle, protein agregatları ve intasomlar boncuk gözeneklerini baypas ederek daha erken elüe olurlar.

Daha küçük monomerik integrazlar ve oligomerler boncuk gözeneklerine girer ve daha geç elüye olur.

İntazomları içeren erken elüsyon fraksiyonlarını daha sonraki analizler için toplayın.

Temiz bir yüzeyde, yeni bir jilet veya bistüri bıçağı kullanarak 200 µL'lik bir pipet ucunun ucundan 2-4 mm kesip çıkararak iki adet ge