JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:52 dk. • August 31st, 2026
Viral partiküller üretmek için hepatit E virüsü (HEV) RNA'sı ile transfekte edilmiş insan karaciğer kanseri hücresi kültürü ile başlayın.
Bazı HEV'ler konakçı kaynaklı bir endozomal membran kazanarak hücreden ayrılırken, diğerleri hücre içinde zarfsız HEV'ler olarak kalır.
Ekstrasellüler HEV'leri toplamak için, hücresel kalıntıları uzaklaştırmak amacıyla kültür süpernatanını toplayın ve filtreleyin.
Enfektifliği korumak için ultra düşük sıcaklıkta saklayın.
Hücre içi HEV'leri toplamak için hücreleri bir tampon çözelti ile yıkayın.
Hücreleri ayırmak için trypsin-EDTA ekleyin, ardından enzimatik aktiviteyi durdurmak için besiyeri ekleyin.
Süspansiyonu bir tüpe aktarın ve santrifüjleyin.
Kalıntı tripsin içeren süpernatanı atın. Peleti resüspanse edin ve bir tüpe aktarın.
Hücreleri sıvı azot içerisinde dondurun ve buz üzerinde çözdürün.
Virüsleri açığa çıkarmak için hücreleri lizlemiş olmak amacıyla dondurma-çözme döngularını tekrarlayın.
Santrifüjleyin, virüsleri içeren süpernatantı toplayın ve ultra düşük sıcaklıkta saklayın.
Altıncı günde, hücre kalıntılarını uzaklaştırmak için süpernatantı 0,45 mikrometre gözenekli bir filtreden geçirin ve elde edilen hücre kültürü kaynaklı hücre dışı hepatit
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin