Embriyonasyonlu Tavuk Yumurtalarının Allantoik Sıvısından Virüs Purifikasyonu
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 5:02 dk. • August 31st, 2026
Virüsle enfekte edilmiş tavuk yumurtalarından toplanan allantoik sıvı içeren bir rezervuarla başlayın.
Bu sıvı, konakçı kaynaklı kontaminanlarla birlikte virüs partikülleri içerir.
Küçük kontaminantların ve virüslerin geçişine izin verirken büyük kontaminantları tutmak için sıvıyı bir derinlik filtresinden geçirin.
Ardından, filtrelenmiş sıvıyı, bir membran yüzeyi boyunca teğetsel olarak aktığı bir filtrasyon sistemine yükleyin.
Daha küçük kontaminantlar membrandan geçerken, virüs tutulur ve konsantre edilir.
Konsantre virüsü bir yoğunluk gradyanına yükleyin ve santrifüjleyin. Virüs, yoğunluğunun gradyanla eşleştiği noktada belirgin bir bant oluşturur.
Virüs bakımından zengin bandı bir diyaliz kasetine toplayın ve bir tampon çözeltiye yerleştirin. Gradyan bileşenleri dışarı difüze olurken, tampon çözeltideki su yarı geçirgen membran aracılığıyla içeri difüze olur.
Ardından, suyu dışarı çekmek ve saflaştırılmış virüsü konsantre etmek için kaseti hipertonik bir çözeltiye yerleştirin.
Newcastle Hastalığı Virüsü veya NDV'nin saflaştırılması için, öncelikle önceden kurulmuş olan deneysel sistemden 50 mililitre PBS geçirerek sistemi hazırlayın.
Tüpte yaklaşık beş mililitre PBS kaldığında pompayı
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin