Sendai Virüsü Aracılı İnsan Kan Hücrelerinin İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelere Yeniden Programlanması

İnsan periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) bir kültür alın.

Yeniden programlama transkripsiyon faktörlerini kodlayan Sendai virüsü ekleyin. Plağın üzerini kapatın ve mühürleyin.

Virüs-hücre temasını artırmak için santrifüjleyin ve inkübe edin.

Virüs füzyonunun ardından, viral RNA, hücresel pluripotens genlerini aktive eden ve yeniden programlamayı başlatmak için soy hattına özgü genleri baskılayan transkripsiyon faktörlerini eksprese eder.

Bu süre zarfında, transduksiyonu gerçekleşmiş PBMC'lerin bir alt kümesi indüklenmiş pluripotent kök hücrelere (iPSC'ler) dönüşür ve adezyon proteinleri eksprese eder.

Bunları matrisle kaplanmış bir kuyucuğa aktarın ve hücreleri santrifüjleyin. Süpernatantı büyüme medyumu ile değiştirin.

İnkübasyon sonrası iPSC'ler matrise tutunurken, transduksiyonu gerçekleşmiş yapışmayan PBMC'ler süspansiyon halinde kalır.

Süspansiyonu kaplanmış bir kuyuya aktarın ve santrifüjleyin. Besiyerini orijinal kuyuya ekleyin ve her ikisini de inkübe edin.

Geriye kalan transduksiyon yapılmış PBMC'ler yeniden programlamayı başlatır, iPSC'lere dönüşür ve yapışır. Bu adım, yeniden programlanmış hücrelerin tutulumunu maksimize eder.

iPSC büyümesini sürdürmek için besiye