JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:41 dk. • August 31st, 2026
İnsan akciğer epitelyal hücreleri içeren tüplerle başlayın.
Biyotinlize influenza virüslerini ekleyin ve buz üzerinde inkübe edin. Virüsler, hücre içine alınmadan hücre yüzeyine bağlanır.
Virüsle bağlanmış hücreleri ayırmak için santrifüjleyin, süpernatantı uzaklaştırın ve yeniden süspanse edin.
İlk zaman noktası tüpüne, biyotinize virüslere bağlanarak kompleksler oluşturan işaretlenmemiş streptavidin ekleyin.
Streptavidin-biotin virüs kompleksine bağlanamayan florofor işaretli streptavidin ekleyin. Hücreleri yıkayın ve fikse edin.
Virüs internalizasyonuna olanak tanımak için sonraki zaman noktasındaki tüpü daha yüksek bir sıcaklıkta inkübe edin, ardından tekrar buza yerleştirin.
İşaretlenmemiş streptavidin ve viral alımı önleyen bir internalizasyon bloklama ajanı ekleyip inkübe edin. Streptavidin, yüzeye bağlı biyotinlenmiş virüslere bağlanır, ardından yıkama yapın.
Hücreleri fikse edin ve onları permeabilize etmek için deterjan içeren bir tampon ekleyin.
Yıkayın ve hücrelere girip biyotine bağlanan florofor işaretli streptavidini ekleyin.
Örnekleri akış sitometrisi ile analiz edin.
Sonraki zaman noktasındaki daha yüksek floresan, başarılı viral internalizasyonu doğrular.
Yıkama işlemini bir
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin