JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:48 dk. • August 31st, 2026
Minimal DNA replikasyonuna sahip, stasyoner fazdaki bir memeli hücresi kültürü alın ve kondisyonlu medyumu toplayın.
Herpes simplex virüsü (HSV) ekleyin ve viral bağlanmayı sağlamak için ara ara çalkalayarak inkübe edin. Bağlanmamış virüsü uzaklaştırmak için yıkayın ve kondisyonlu besiyerini geri ekleyin.
İnkübasyon üzerine virüs, konak membranı ile kaynaşarak nukleokapsidi sitoplazmaya salar.
Viral dsDNA çekirdeğe girer, daireselleşir ve viral DNA replikasyonu için viral proteinleri eksprese eder.
Viral ve konak proteinleri viral DNA'yı açar ve bir RNA primeri sentezler. Ardından, viral DNA polimeraz kompleksi bağlanarak DNA sentezi için primeri uzatır.
Replikasyon ilerledikçe, kültüre bir nukleozid analoğu ekleyin. Bu analog hücrelere girer ve trifosfat formuna dönüştürülür.
Konak DNA replikasyonu minimal olduğundan, analog öncelikle replike olan viral DNA'ya dahil edilerek viral genomları işaretler.
Etiketlenen viral genomlar, ilişkili proteinlerin sonraki proteomik analizleri için hazırdır.
Bu prosedüre, metin protokolünde açıklandığı şekilde MRC-5 hücrelerinin kültüre edilmesiyle başlayın. Ardından, HSV-1'i soğuk tris-tamponlu salin veya TBS içinde seyreltin. Sonraki adımlarda, hücrel
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin