JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 5:13 dk. • August 31st, 2026
Alkin modifiyeli nükleotidlerle işaretlenmiş, viral genomlar içeren hücre çekirdeklerini alın.
Çekirdekleri, biotin-azid ve bakır iyonlarından oluşan bir karışımın içinde süspanse edin ve inkübe edin.
Bakır iyonu, azid ve alkin grubunun kovalent bağlanmasına yardımcı olur.
Santrifüjleyin ve süpernatantı atın.
Tampon içerisinde yeniden süspande edin, aktarın ve çöktürmek için santrifüjleyin.
Lizise yardımcı olmak için peleti şok dondurun, ardından çözdürün.
Çekirdekleri parçalamak için tekrar süspande edin ve sonikasyon uygulayın.
Santrifüjleyin ve protein-viral DNA komplekslerini içeren süpernatantı toplayın.
Kontaminanları uzaklaştırmak için süpernatantı filtreleyin.
Süzüntüyü seyreltin.
Biyotinline edilmiş protein-DNA kompleksleri ile bağlanmayı kolaylaştırmak için streptavidin kaplı manyetik boncuklar ekleyin ve inkübe edin.
Boncukları toplamak için bir manyetik alan uygulayın ve kontaminantları uzaklaştırmak için yıkayın.
Yıkama işlemini tekrarlayın.
Proteinleri ayırmak ve denatüre etmek için bir elüsyon tamponu ekleyin ve ısıtın.
Boncukları ayırın ve elüatı toplayın.
İzole edilen proteinleri hızla dondurun. Daha sonraki analizler için ultra düşük sıcaklıklarda saklayın.
PBS tamamen uzaklaştır
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin