Mühendislik Yöntemleriyle Oluşturulmuş Permisif Hücre Hatları Kullanılarak Yabani Drosophila Türlerinden Endojen Virüslerin İzolasyonu
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 1:32 dk. • October 29th, 2026
Aynı cinsiyet ve türe ait anestezi uygulanmış yetişkin Drosophila içeren bir tüple başlayın.
Endojen viral popülasyonları ve bakterileri serbest bırakmak için bir tampon ekleyin ve homojenize edin.
Homojenatı santrifüjleyin, ardından bakteri ve kalıntıları uzaklaştırmak için süpernatanı santrifüj yoluyla bir membrandan geçirin.
Filtratı, RNA virüslerine geçirgen, mühendislik ürünü Drosophila hücre kültürleri içeren çok kuyucuklu bir plakaya aktarın ve inkübe edin.
Virüsler, reseptör aracılı endositoz yoluyla konak hücreye girer.
Hücre içine girdikten sonra viral genom replike olur ve çift zincirli RNA (dsRNA) ara ürünleri üretir.
Konak hücreler, dsRNA'ya bağlanan ve onun konak savunma enzimi Dicer tarafından yıkımını önleyen bir baskılayıcı protein eksprese eder.
Bu durum, viral RNA sentezini ve viral protein üretimini sağlayarak viral replikasyonu ve amplifikasyonu teşvik eder.
Yüksek viral yükler, konak hücre büyümesini bozar ve sitopatik etkilere yol açar.
Plakayı kısa süreliğine santrifüj edin.
Viral popülasyonları içeren süpernatantı toplayın ve ileri analizler için düşük sıcaklıkta saklayın.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin