JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:35 dk. • August 31st, 2026
Bir adenovirüs ile enfekte edilmiş memeli hücreleri ile başlayın.
Hücreleri liz etmek ve virionları serbest bırakmak için tekrarlayan dondurma-çözme döngüleri uygulayın.
Kalıntıları çöktürmek için lizatı santrifüjleyin. Viral partikülleri içeren süpernatantı toplayın.
Yoğunluk tabanlı ayırma için viral süpernatantı, basamaklı bir sezyum klorür gradyanının üzerine katmanlayın.
Viral partiküllerin yüzerlik yoğunluklarına göre göç etmelerini sağlamak için ultrasantrifüj kullanın.
Tam adenoviral genom içeren bozulmamış viryonlar, paketlenmiş DNA nedeniyle daha yoğundur ve daha alt bir banda çökerken, daha hafif olan boş kapsidler ve kalıntılar üst katmanlarda kalır.
Üst tabakaları uzaklaştırın. Genom içeren virionların bulunduğu alt bandı toplayın.
Virionları tekdüze yoğunluktaki sezyum klorür içinde yeniden süspande edin ve ayrımı optimize etmek ve tam partikülleri konsantre etmek için tekrar ultrasantrifüj işlemine tabi tutun.
Üst katmanları atın ve alt bandı geri kazanın.
Sezyum klorürü uzaklaştırmak için örneği diyalize edin.
Yüksek saflıktaki, genom içeren adenoviral vektörler artık sonraki uygulamalar için hazırdır.
Sezyum klorür gradyan saflaştırması için viral lizatı hazırlamak amacıyla,
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin