JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:08 dk. • August 31st, 2026
İşleme, torasik bölgedeki tüyleri tıraşlanmış ve sırtüstü pozisyona getirilmiş anestezi altındaki bir fare ile başlayın.
Tıraş edilmiş cildi dezenfekte edin.
Kalbi görüntülemek ve sol ventrikülün dış duvarını belirlemek için ultrason görüntüleme kullanın.
Kalp fonksiyonunu etkilediği şüphelenilen bir test genini kodlayan rekombinant virüs içeren bir mikroşırınga alın.
Ultrason rehberliğinde, iğneyi ventrikül duvarına yerleştirin.
Virüsü duvarın kas tabakasına enjekte edin.
Daha geniş bir gen ekspresyonu elde etmek için, ventrikülün farklı bölgelerini hedefleyerek ikinci ve üçüncü enjeksiyonları gerçekleştirin.
İğneyi geri çekin ve farenin iyileşmesini bekleyin.
Virüs, ventriküler kas hücreleri üzerindeki reseptörlere bağlanarak reseptör aracılı endositozu ve viral genomun çekirdeğe taşınmasını başlatır.
Viral genom ekspresyonu, kodlanan proteinin sentezlenmesine yol açar.
Fare modeli, virüsle indüklenen gen ekspresyonunun kalp fonksiyonu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için artık hazırdır.
Başlamak için, anestezi altındaki farenin sol alt göğüs bölgesini iyot bazlı veya klorheksidin bazlı bir temizleyici ve alkol ile sırayla, dairesel hareketlerle üç kez sterilize edin. Ultrason görüntüleme kılavuzluğunda, virüs içeren şırınganın iğnesini hayvanın göğsüne yerleştirin.
İğne ucunu sol ventrikül ön serbest duvarına yaklaştırın ve yavaşça 10 ila 15 µL virüs enjekte edin. Başarılı enjeksiyonu, ultrason görüntülerinde iğne ucunun yakınındaki artan parlaklık aracılığıyla doğrulayın. İğneyi kalpten geri çekin ve aynı miktarda virüsün ikinci ve üçüncü enjeksiyonları için sol ventrikülün diğer bölgelerine yerleştirin.