Adeno-ilişkili Virüs Vektörleri Kullanarak Hümanize Sıçan Karaciğerinin Transdüksiyonu

İnsan karaciğer hücreleri ile yeniden popüle edilmiş, deselülerize bir sıçan karaciğer iskeleti içeren bir biyoreaktör sistemi ile başlayın.

İskele, besin sağlamak amacıyla medyum sirkülasyonu yapan bir akış sisteminde tutulur.

Rekombinant adeno-ilişkili virüs vektörü içeren bir tampon çözelti ile bir şırıngayı doldurun.

Vektör, floresan bir raporlayıcı ve bir gen susturma RNA'sını kodlayan bir transgen kaseti içeren kendini tamamlayıcı DNA taşımaktadır.

Besiyeri akışını durdurun ve giriş borusunun bağlantısını kesin.

Vektörü, iskeleyi besleyen ana kan damarı aracılığıyla enjekte edin.

Vektör-hücre etkileşimine izin vermek için inkübe edin.

Vektör, reseptör aracılı endositoz yoluyla karaciğer hücrelerine girer.

İçeri girdiğinde, vektör endozomdan kaçar ve kendi kendine tamamlayıcı DNA'sını çekirdeğe salar.

Kendi kendini tamamlayıcı DNA, floresan protein ve gen susturucu RNA üreterek doğrudan transgen ekspresyonuna olanak tanır.

İskele boyunca dolaşımı yeniden sağlamak için besiyeri akışını kademeli olarak yeniden başlatın.

Transdükte edilen karaciğer modeli artık sonraki analizler için uygundur.

Şimdi karaciğer modelini transduksiyon işlemine tabi tutun. Öncelikle, 5 ml PBS içerisinde 27 trilyon vektörü bir şırıngaya çekin. Mililitre başına 5 mikrogram olacak şekilde fenol kırmızısı eklenebilir.

Ardından karaciğeri medya devresinden ayırın ve vektörleri sisteme enjekte edin. Enjeksiyondan sonra sistemi, pompalama yapmadan bir saat boyunca inkübe edin. Daha sonra akış hızını, daha önce açıklandığı şekilde kademeli olarak artırın.

Daha sonra, transdukt edilmiş karaciğer altı gün boyunca inkübe edilirken, iki günde bir ortamın 50 mililitresini değiştirin.