Hava-Sıvı Arayüzünde Kültürlenen İnsan Nazal Epitel Hücrelerinde Viral Büyüme

Çok kuyucuklu bir plaka içindeki transwell insert üzerinde kültüre edilmiş, mukusla kaplı insan nazal epitel hücreleri ile başlayın.

Kültürün bazal tarafı medyuma temas ederken apikal yüzey havaya maruz bırakılarak burun boşluğunun hava-sıvı arayüzü simüle edilir.

Mukus tabakasını uzaklaştırmak için kültürü tampon ile yıkayın.

Serum içermeyen ortamda süspanse edilmiş koronavirüsü kültüre ekleyin.

Viral adsorpsiyonu sağlamak için plakayı ara ara sallayarak inkübe edin.

Viral inokülumu uzaklaştırın ve bağlanmamış virüsleri temizlemek için tamponla yıkayın.

İnserti çıkarın ve kuyucuğu taze besiyeri ile doldurun.

Viral enfeksiyonun gerçekleşmesi için plağı inkübe edin.

Koronavirüs, hücre yüzeyi reseptörüne bağlanır, endositoz yoluyla içeri girer ve genomunu sitoplazmaya salar.

Viral genom replike olur ve yeni virüsler oluşturacak şekilde birleşen proteinler üretir.

Yeni virüsler apikal olarak salınır, yakındaki hücreleri enfekte etmek için yayılır ve viral büyümeyi artır.

Nazal hava-sıvı arayüzü veya ALI kültürlerini, bazal ve apikal odacıkları olan transwell'lerde büyütün ve diferansiye edin. Ayrıştırılmış insan sinonasal hücrelerini daldırma (submerged) koşullarında genişletin; ardından, kültür