JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 5:56 dk. • August 31st, 2026
Hücresel proteinler ve viral partiküllerle agregasyon yapmış hücresel DNA içeren bir hücre lizatı ile başlayın.
Hücresel DNA'nın enzimatik yıkımını aktive etmek ve DNA-protein agregatlarını bozmak için önce magnezyum iyonları, ardından bir nükleaz ekleyin.
Kalıntıları ayırmak için santrifüjleyin ve viral partikülleri içeren süpernatanı toplayın.
Süpernatanı, yukarıdan aşağıya doğru artan konsantrasyonlara sahip kesikli bir iodixanol gradyanının üzerine katmanlandırın ve ardından tüpü tamponla doldurun.
Bileşenleri yoğunluğa göre ayırmak için ultrasantrifüj kullanılır. Virüs partikülleri, yüksek ve orta yoğunluktaki katmanlar arasındaki ara yüzde birikir.
Bu ara yüze bir iğne yerleştirin ve viral partikülleri bir tüpe toplayın.
Viral partikül agregasyonunu önleyen, stabilize edici bileşenler içeren bir tampon ekleyin.
Ardından çözeltiyi, membran filtreli bir tüpe aktarın.
Viral partikülleri filtrenin üzerinde yoğunlaştırmak için santrifüjleyin.
Stabilize edici madde takviyeli tamponu ekleyin ve saflaştırılmış viral partikülleri elde etmek için tekrar santrifüjleyin.
Transfekte edilmiş hücreleri toplamak için, kültür ortamını kullanarak hücreleri pipetleme yoluyla yerinden ayırın ve süspanse e
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin