Viral Onkogenlerin Retroviral Transdüksiyonu Yoluyla Endotelyal Hücrelerin Ölümsüzleştirilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:07 dk. • August 31st, 2026
Viral onkogenleri ve bir antibiyotik direnç genini kodlayan retroviral partiküller içeren bir besiyeri alın.
Hücre kalıntılarını uzaklaştırmak için medyumu santrifüjleyin.
Viral partikülleri içeren süpernatantı toplayın ve endotel hücre kültürünün üzerine ekleyin.
Viral girişine izin vermek için inkübe edin.
Viral RNA, konak genomuna entegre olan DNA'ya tersine yazılarak kopyalanır.
Antibiyotik direnç geni, bir direnç proteini üretir. Onkogenler ise hücre bölünmesini kontrol eden tümör baskılayıcı proteinlere bağlanan ve onları inaktive ederek hücre ömrünü uzatan proteinler üretir.
Besiyerini taze besiyeri ile değiştirin.
Stabil viral DNA entegrasyonunu sağlamak için tekrar inkübe edin.
Besiyerini uzaklaştırın ve hücreleri yıkayın.
Hücreleri ayırmak için enzimatik bir disosyasyon solüsyonu ekleyin.
Hücre süspansiyonunu aktarın, santrifüjleyin ve süpernatantı uzaklaştırın.
Pelleti yeniden süspande edin ve bir flaska aktarın.
Besiyerine bir antibiyotik ekleyin.
Yalnızca antibiyotik direnç proteinini eksprese eden hücreler hayatta kalır ve böylece viral onkogen proteinlerle ölümsüzleştirilmiş hücreler seçilmiş olur.
Bir gece boyunca inkübasyonun ardından, PA317 hücre kültüründen besiyerini toplayın
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin