JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:52 dk. • September 30th, 2026
Bir faj represör proteini tarafından baskılanan ve uykuda bir lizojenik fazı sürdüren, entegre bir profaj genomuna sahip bir bakteri kültürü ile başlayın.
Hücresel stresi tetiklemek için bir indükleyici ekleyin ve çalkalamalı inkübasyon yapın.
Hücresel stres, baskılayıcı proteinin otoklevajını tetikleyerek profajın lizojeniden litik replikasyona geçmesini sağlar.
Profaj DNA'sı bakteriyel genomdan ayrılır ve sırasıyla erken düzenleyici genleri, orta DNA replikasyon genlerini ve geç yapısal ve lizis genlerini transkribe eder.
İndükleyiciyi seyreltmek için kültürü geniş hacimli bir ortama aktarın ve hücrelerin toparlanmasına izin vermek için inkübe edin.
Belirli aralıklarla, transkripsiyonu durdurmak ve bakteriyel hücrelerdeki RNA profilini korumak için bir stop solüsyonu ekleyin.
Kültürü santrifüjleyin ve süpernatantı atın. Hücreleri yeniden süspande edin, süspansiyonu küçük bir tüpe aktarın ve santrifüjleyin.
Süpernatantı uzaklaştırın ve RNA bütünlüğünü korumak için peleti hızla dondurun.
Son olarak, hücreleri parçalamak için bir RNA ekstraksiyon reaktifi ekleyin ve homojenleştirin. Numune, RNA izolasyonu ve ardından yapılacak transkriptomik analiz için hazırdır.
Ardından, 80 mililitre kültü
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin