JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:06 dk. • August 31st, 2026
Adeno-ilişkili virüs vektörleri üreten transfekte edilmiş memeli hücreleri içeren çok katmanlı bir hücre odası ile başlayın. Hücre odası, yüksek verimli viral hasat elde edilmesine yardımcı olur.
Adherent hücreleri yerinden oynatmak, virüs içeren hücrelerin ve hücre dışı viral partiküllerin ortama salınmasını sağlamak için hazneyi kuvvetlice çalkalayın.
İçeriği bir tüpe aktarın ve virüs içeren hücreleri çöktürmek için santrifüjleyin.
Ekstraselüler virüs içeren süpernatanı toplayın ve bir saklama şişesine aktarın.
Çökelti liziz tamponu içerisinde yeniden süspanse edin ve inkübe edin.
Tampon çözeltideki enzimler ve deterjanlar hücreleri liz eder ve hücre içindeki bütün haldeki virüslerin çözeltiye salınmasını sağlar.
Hücresel kalıntıları çöktürmek için lizatı santrifüjleyin. Virüs içeren süpernatantı toplayın ve hücre dışı virüsü içeren aynı saklama şişesine ekleyin.
Ham viral süspansiyonu, ileri saflaştırma işlemine kadar düşük sıcaklıkta saklayın.
İnkübasyon sonrası, hücre kültür haznesini hücreler kopana kadar ortam bulanıklaşıncaya dek kuvvetlice çalkalayın ve içeriği dört adet 500-mililitrelik santrifüj tüpüne boşaltın.
Hücreleri 4 °C'de 30 dakika boyunca 18,000 x g'de santrifüj ederek ç
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin