JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:35 dk. • August 31st, 2026
Adeno-ilişkili virüs (AAV) vektörleri ve konak kaynaklı kontaminantlar içeren filtrelenmiş bir hücre lizatı ile başlayın.
Lizatı heparin bazlı bir afinite kolonundan geçirin.
Viral kapsid proteinleri, negatif yüklü heparin gruplarına elektrostatik olarak bağlanır.
Bağlanmamış kontaminanları uzaklaştırmak için kolonu bir tampon çözelti ile durulayın.
Membranöz kalıntıları çözmek için deterjan içeren bir tampon uygulayın.
Deterjan içermeyen tamponla tekrar durulayın.
İyonik bir ortam oluşturmak için katyonlarla desteklenmiş bir tampon ekleyin, ardından zayıf bağlanan safsızlıkları uzaklaştırmak için orta derecede tuz içeren bir tamponla yıkayın.
Kapsid-heparin etkileşimlerini bozmak ve viral partikülleri elüye etmek için yüksek tuzlu bir tampon ekleyin.
İntakt viral partiküller bakımından zenginleştirilmiş elüsyon fraksiyonlarını toplayın ve bunları filtre membranlı santrifüj konsantratör tüplerine aktarın.
Fazla tamponu uzaklaştırmak için tüpleri santrifüjleyin, ardından konsantre viral fraksiyonları bir tüpe toplayın.
Kalıntı viral partikülleri geri kazanmak ve verimi maksimize etmek için membranı tamponla durulayın.
Ham lizatı dört derece Celsius'ta gece boyunca çözdürün.
Çözündükten sonra, 0
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin