Sıçan Fertilize Embriyolarının Lentiviral Vektör Tabanlı Transdüksiyonu

Merkezinde bir damla embriyo kültür medyumu bulunan ve buharlaşmayı önlemek için mineral yağ ile kaplanmış bir mikroenjeksiyon kabı alın.

Kabı bir ters mikroskop altına yerleştirin.

Mikroenjeksiyon kapilerini ve tutucu pipeti, mikroskop altında bir mikromanipülatör düzeneğine yerleştirin.

Mikroenjeksiyon kapilaritesi, transgen taşıyan lentiviral vektörlerin bir süspansiyonu ile doldurulur.

Ardından, döllenmiş sıçan embriyolarını ortama aktarın.

Tutma pipeti ile vakum uygulayarak bir embriyoyu sabitleyin.

Daha yüksek büyütme altında, mikroenjeksiyon kapilerini embriyonun hücre dışı glikoprotein kılıfı olan zona pellucida üzerinden geçirin ve lentiviral süspansiyonu perivitelin boşluğa enjekte edin.

Ardından, enjekte edilen embriyoları bir kültür kabına aktarın ve inkübe edin.

Virüs embriyoya girer ve transgeni içeren genomunu sitoplazmaya salar.

Daha sonra, tersine yazılarak DNA'ya dönüştürülür ve embriyonun genomuna entegre olarak transgeni dahil eder.

Transdükte edilen embriyolar artık işlemeye hazırdır.

Tek hücreli evredeki embriyoların zona pellucida altına lentiviral vektör mikroenjeksiyonu için, filamanlı bir pipet çekici kullanarak mikroenjeksiyon borosilikat cam kapilerleri hazırlayın.