JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:21 dk. • September 30th, 2026
Kontaminan olarak kalıntı bakteriyel nükleaz içeren saflaştırılmış viral integraz enzim fraksiyonu ile başlayın.
Numuneyi, düşük tuzlu bağlama tamponu ile önceden dengelenmiş bir heparin-Sepharose kolonuna yükleyin.
Karışım kolondan geçerken, integraz heparin ligandına kontamine nükleazdan daha güçlü bir şekilde bağlanır.
Ardından, kolondan geçen tampontaki tuz konsantrasyonunu kademeli olarak artırın.
Düşük tuz konsantrasyonlarında, zayıf bağlanan nükleazlar önce elüe olurken, güçlü bağlanan integraz daha sonra, daha yüksek tuz konsantrasyonlarında elüe olur.
Kontamine nükleazı integrazdan ayırmak için elüye edilen fraksiyonları ayrı ayrı toplayın.
Her fraksiyona SDS-PAGE örnek tamponu ekleyin ve proteinleri denatüre etmek için ısıtın. Örnekleri bir SDS-PAGE jeline yükleyin ve elektroforetik ayırmayı gerçekleştirin.
Boyanmış jeli gözlemleyin.
Belirgin bir integraz bandı içeren ve görünür kirletici proteinlerin bulunmadığı, böylece görünür saflığın sağlandığı fraksiyonları belirleyin.
Prototype foamy virus integrase'nin heparin afinite kromatografisi fraksiyonlamasını gerçekleştirmek için, örneğe 1,5 hacim tampon C ekleyerek sodyum klorür konsantrasyonunu 200 millimolar'a düşürün. Ardından,
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin