JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:25 dk. • September 30th, 2026
Memeli epitel hücreleri içeren çok kuyucuklu bir plaka alın.
Koronavirüs spike proteinleri içeren bir pseudovirüsün seri dilüsyonlarını hazırlayın.
Her kuyucuktaki besiyerini seyreltilmiş viral süspansiyonla değiştirin.
Viral spike proteinlerin konak hücre reseptörüne bağlanmasına izin vermek için ara ara sallayarak inkübe edin.
Besiyerini uzaklaştırın. Viral yayılımı kısıtlayan yarı katı bir overlay oluşturmak için metilselüloz içeren bir besiyeri ekleyin ve inkübe edin.
Virüs hücreye girer ve RNA genomunu salar.
RNA, hücreden çıkan viral partiküller şeklinde birleşen yeni viral RNA ve proteinlerin sentezini yönlendirir.
Serbest kalan virüsler komşu hücreleri enfekte ederek plak adı verilen berrak bir bölge oluşturur.
Üst tabakayı kaldırın ve hücreleri yıkayın.
Bir boya ekleyin ve plakayı çalkalayarak inkübe edin.
Kuyucukları yıkayın ve kurulayın.
Boya hücreleri boyarken, plaklar şeffaf kalır.
Viral konsantrasyonunu belirlemek için her kuyucuktaki görünür plakları sayın.
Viral titreyi belirlemek için, Vero E6 hücrelerini altı kuyucuklu plaklara kuyucuk başına 6 × 10⁵ hücre ekim yoğunluğunda ekleyin ve gece boyunca inkübe edin. Ertesi gün, yedi adet mikro santrifüj tüpüne 900 µL besiyeri ekleye
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin