JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:09 dk. • September 30th, 2026
Rekombinant bir vaccinia virüsüne maruz bırakılmış memeli hücreler içeren çok kuyucuklu bir plaka ile başlayın.
Rekombinant virüs; gen ekspresyonunun erken, orta ve geç evrelerini sırasıyla takip etmek için her biri evreye özgü bir promotör tarafından kontrol edilen yeşil, kırmızı ve mavi floresan proteinleri kodlar.
Virüs, reseptör aracılı endositoz yoluyla hücreye girer ve viral çekirdeğini sitoplazmaya salar.
Viral çekirdekteki transkripsiyonel mekanizma, yeşil floresans ile işaretlenen erken gen ekspresyonunu yönlendirir.
Erken proteinler, genomun kılıfından çıkarılmasını sağlayarak viral DNA'yı sitoplazmaya salar ve burada DNA polimeraz viral genomu replike eder.
Ardından, kırmızı floresansla belirtilen ara gen ekspresyonu, geç genlerin aktivasyonu için gerekli olan transkripsiyon faktörlerini üretir.
Ardından, mavi floresans ile belirtilen geç gen ekspresyonu, olgun virionların oluşumu için gerekli olan yapısal proteinleri üretir.
Floresansı korumak için bir fiksatif ekleyin ve kısa bir süre inkübe edin.
Fiksatif maddeyi uzaklaştırın ve ardından tampon ekleyin.
Enfekte hücrelerde floresansı ölçmek ve evreye özgü viral gen ekspresyonunu nicelleştirmek için bir spektrofotometre kullanın
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin