JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:31 dk. • September 30th, 2026
Düşük serumlu bir ortamda memeli hücresi kültürü ile başlayın.
DNA-lipid kompleksini hücrelere ekleyin.
Kompleks, lentiviral paketleme plazmidlerini ve ilgilenilen geni kodlayan bir ekspresyon plazmidini içerir.
Kompleksin hücre içine girişini sağlamak için inkübe edin.
Kalıntı transfeksiyon reaktifini uzaklaştırmak için besiyerini değiştirin ve inkübe edin.
Hücre içinde, plazmit DNA'lar çekirdeğe girer ve ilgilenilen geni taşıyan viral RNA'nın yanı sıra kapsid ve zar proteinleri, ters transkriptaz ve integraz dahil olmak üzere viral bileşenlerin sentezini yönlendirir.
Bu bileşenler, konak membranından tomurcuklanan rekombinant lentiviral partikülleri oluşturacak şekilde birleşir.
Serbest kalan viral partikülleri içeren medyumu toplayın.
Hücre kalıntılarını çöktürmek için santrifüjleyin ve kalıntı kontaminantları uzaklaştırmak için viral süpernatantı filtreleyin.
İntakt viral partikülleri çöktürmek için yüksek hızda santrifüjleyin.
Süpernatantı atın ve viral peleti düşük hacimli taze besiyerinde yeniden süspanse edin.
Konsantre rekombinant lentivirüsü, sonraki uygulamalar için düşük sıcaklıkta saklayın.
Konsantre lentivirüs üretimine başlamak için 1,5 × 10⁶ HEK-293T hücresini 60 mm'lik bir kab
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin