JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:08 dk. • September 30th, 2026
Ebola virüsü genomunu taklit eden ve viral yapısal proteinleri, glikoproteinleri ve lusiferaz raporerini kodlayan bir minigenom plazmidi ile başlayın.
Replikasyon ve transkripsiyon için gerekli olan T7 polimeraz, viral nükleoprotein ve viral polimeraz bileşenlerini kodlayan yardımcı plazmidleri ekleyin.
Plazmidlere lipid tabanlı bir transfeksiyon reaktifi ekleyin, vortekslleyin ve plazmid-lipid kompleksleri oluşturmak için karışımı inkübe edin.
Bu karışımı insan böbrek hücrelerine ekleyin, nazikçe karıştırın ve inkübe edin.
Lipid kompleks hücre ile kaynaşır. Plazmidler hücreye girer.
Yardımcı plazmitler, kendilerine karşılık gelen proteinleri kodlar.
Daha sonra T7 polimeraz, minigenomu viral genomik RNA'ya transkribe eder ve bu RNA hemen nükleoproteinlerle kaplanır.
Viral polimeraz kompleksi, viral genomik RNA'ya bağlanır ve onu viral mRNA'lara transkribe eder. Bu mRNA'lar, viral yapısal proteinleri ve glikoproteinleri üretir.
Viral proteinler, lusiferaz rapor genini içeren, patojenik olmayan, transkripsiyon ve replikasyon yeteneğine sahip virüs benzeri partiküller veya trVLP'ler oluşturmak üzere birleşir.
Hücre canlılığını sürdürmek ve trVLP üretimini desteklemek için taze besiyeri ile tak
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin