JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:56 dk. • September 30th, 2026
Nükleik asit içermeyen kusurlu viral partiküller gibi kontaminantların yanı sıra, çeşitli virüs karışımlarını içeren bir süspansiyon alın.
Bu virüsler, genomu olan virüsleri kontaminanlardan ayırt etmek için nükleik asite bağlanan floresan bir boya ile önceden boyanmıştır.
Süspansiyonu, her bir partikülün ışık saçılımı ve floresans yoğunluğu açısından analiz edildiği bir floresan aktivasyonlu hücre ayırıcıdan geçirin.
Işık saçılım sinyali partikül boyutunu yansıtırken, floresan yoğunluğu nükleik asit içeriğini belirtir.
Floresans göstermeyen kontaminantları ve anormal derecede yüksek floresans sergileyen agregatları hariç tutun.
Genom içeren tekil virüs partiküllerini seçin ve immobilizasyon için bunları doğrudan agaroz kaplı bölmeli bir lama ayırın.
Virüsleri gömmek için her kuyucuğun üzerini ek agaroz ile kaplayın.
Bunlar artık tek virüs genom amplifikasyonu ve analizi için hazırdır.
Özel ileri saçılım fotomultiplier tüpler veya FSC-PMT ile donatılmış bir akış sitometresi kullanarak virüsleri ayırmak için; öncelikle viral partikülleri 0,1 mikron filtrelenmiş Tris-EDTA içinde seyrelterek başlayın. T4 ve lambda faj partikülleri içeren karma bir topluluk için, sinyal-gürültü oranını maksimi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin