JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:37 dk. • September 30th, 2026
Hepatit C virüsü içeren bir memeli hücre kültürü süpernatı ile başlayın.
Viral süspansiyonu büyüme ortamında seri olarak seyreltin.
Her bir dilüsyonu hepatoma hücreleri monokatmanına inoküle edin ve inkübe edin.
Virüs hücrelere girer, genomunu salar ve yapısal olmayan replikasyon proteini dahil olmak üzere viral proteinleri eksprese eder.
Bu durum, tomurcuklanarak ayrılan ve komşu hücreleri enfekte ederek enfekte hücrelerden oluşan odaklar (foci) meydana getiren yeni viral partiküller üretir.
İnkübasyonun ardından besiyerini uzaklaştırın ve bir fissyatif ekleyin. Hücreleri sabitlemek ve membranı permeabilize etmek için soğuk sıcaklıkta inkübe edin.
Yıkama işlemini gerçekleştirin ve spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloklama tamponu ekleyin.
Yapısal olmayan replikasyon proteinine bağlanan primer antikorları ekleyin.
Bağlanmamış antikorları uzaklaştırmak için yıkayın.
Ardından, primer antikorlara bağlanan florofor konjuge sekonder antikorları ekleyin.
Bağlanmamış antikorları uzaklaştırmak için tekrar yıkayın. Çekirdekleri boyamak için bir DNA bağlayıcı boya ekleyin.
Süpernatantın virüs konsantrasyonunu belirlemek için floresan mikroskobu altında görüntüleyin ve floresan oda
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin