JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:29 dk. • September 30th, 2026
Bir grubu virüsle enfekte edilmiş, diğer grubu ise enfekte edilmemiş, üridin analoğu ile ön işlem görmüş memeli hücreler taşıyan lamellerle başlayın.
Virüsle enfekte olmuş hücrelerde, viral proteinler konak transkripsiyon mekanizmasına bağlanarak konak RNA üretimini inhibe ederken, enfekte olmamış hücrelerde RNA sentezi kesintisiz devam eder.
Bir tampon çözelti ile yıkayın. Hücreleri sabitlemek için paraformaldehit ekleyin, ardından yıkayın. Hücre membranlarını geçirgenleştirmek için bir deterjan ekleyin, ardından yıkayın.
Lamelleri nemli bir hazneye aktarın.
Floresan azid, bir katalizör ve bir indirgeyici ajan içeren klik boyama çözeltisini ekleyin, ardından karanlıkta inkübe edin.
İndirgeyici ajan, floresan azidin üridin ile işaretlenmiş yeni sentezlenen RNA'ya bağlanmasını sağlayan katalizörü aktive eder.
Lamelleri tamponla durulayın, suya batırın ve fazla nemi alın.
Sönümleme önleyici (antifade) bir montaj ortamı kullanarak, lamelleri bir lam üzerine monte edin ve havada kurumasını bekleyin.
Ters floresan mikroskobu altında, enfekte hücrelerdeki sinyal yoğunluğunun enfekte edilmemiş hücrelere kıyasla düşük olması, virüs kaynaklı transkripsiyonel baskılamayı gösterir.
12 kuyucuklu bir do
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin