JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:35 dk. • September 30th, 2026
Memeli hücre kültürlerini alın. Kontrol grubunu enfekte etmeden, test kültürünü bir virüs ile enfekte edin.
Virüs adsorpsiyonuna izin verin, ardından besiyerini değiştirin.
Virüs hücreye girer ve genomunu serbest bırakır. Virüs, konak transkripsiyon faktörü komplekslerini destabilize eden ve konak transkripsiyonunu baskılayan bir virülans proteini eksprese eder.
Buna karşın kontrol hücreleri aktif transkripsiyonu sürdürür.
Yeni sentezlenen RNA'lara dahil olan bir nükleozid analoğu ekleyin.
Yıkanmış hücreleri toplayın.
Hücrelerin yapılarını korumak için onları sabitleyin. Hücreleri santrifüjleyin ve bir tampon çözelti ile yıkayın.
Hücreleri permeabilize etmek için bir deterjan ekleyin, ardından yıkayın.
Yeni sentezlenen RNA'ları etiketlemek için nükleozid analoğu ile reaksiyona giren, kimyasal olarak modifiye edilmiş bir floresan boya ekleyin; ardından yıkayın.
Enfekte hücreleri işaretlemek için viral antijenleri floresanla etiketlemek amacıyla immün boyama yapın.
Konak RNA ve viral antijen floresansını tespit etmek için akış sitometrisi kullanın.
Kontrol ve test popülasyonları arasındaki RNA floresan yoğunluğunu karşılaştırın. Test popülasyonundaki, RNA floresanında azalmaya işaret eden aşağı
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin