JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:36 dk. • September 30th, 2026
Besin açısından zengin bir ortamda büyütülmüş insan böbrek epitelyal hücre kültürü ile başlayın.
Serum girişimini en aza indirmek ve transfeksiyon verimliliğini artırmak için ortamı düşük serumlu bir ortamla değiştirin.
Transfeksiyon karışımını hücrelere damla damla ekleyin.
Karışım, ilgilenilen geni taşıyan bir retroviral DNA konstrüktü, temel viral proteinleri sağlayan bir paketleme plazmidi ve transfeksiyonu kolaylaştırmak için plazmid DNA ile kompleksler oluşturan polietilenimin içerir.
DNA kompleksinin hücreler tarafından alınmasını sağlamak için hücreleri inkübe edin.
Kalıntı transfeksiyon reaktiflerini uzaklaştırmak için besiyerini değiştirin.
Hücre içinde plazmid DNA çekirdeğe girer ve burada viral proteinlerin yanı sıra ilgi duyulan geni taşıyan viral RNA'nın üretimini yönlendirir.
Bu bileşenler birleşerek rekombinant retroviral partiküller şeklinde ortama tomurcuklanır.
Virüs içeren besiyerini toplayın ve viral stabiliteyi korumak için kısa süreliğine düşük sıcaklıkta saklayın.
Hücresel kalıntıları çöktürmek için santrifüjleyin.
Viral süpernatantı alikotlayın, sıvı azot içerisinde şok dondurun ve daha sonraki gen transferi deneyleri için düşük sıcaklıkta saklayın.
16 santimetrelik b
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin