JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:44 dk. • September 30th, 2026
RSV replikasyon ve transkripsiyon proteinlerini kodlayan yardımcı plazmidleri ve tam uzunlukta, GFP eksprese eden bir RSV antigenom cDNA'sı taşıyan ayrı bir plazmidi içeren bir plazmid karışımı ile başlayın.
Her bir plazmit, T7 promotörünün kontrolü altına yerleştirilmiştir.
Lipozom tabanlı bir transfeksiyon reaktifi ekleyin ve kompleks oluşumuna izin vermek için inkübe edin.
Bu kompleksleri, T7 RNA polimeraz eksprese eden genetik olarak modifiye edilmiş hamster böbrek hücrelerine aktarın ve inkübe edin.
Plazmit kompleksleri hücrelere girer ve burada T7 RNA polimeraz, RSV plazmitlerini transkribe eder.
Bu işlem, replikasyon ve transkripsiyon proteinlerini kodlayan viral mRNA'lar üretir ve pozitif yönlü RSV antigenomik RNA oluşturur.
Bu mRNA'lar, konak hücre mekanizmasını kullanarak, fonksiyonel bir RSV polimeraz kompleksi oluşturan viral replikasyon ve transkripsiyon proteinlerini üretirler.
RSV polimeraz kompleksi daha sonra pozitif anlamlı RNA'yı viral genomik RNA'ya dönüştürür.
Bu genomik RNA, yapısal proteinleri ve GFP'yi kodlayan viral mRNA'ların sentezini yönlendirir.
Bir floresan mikroskobu altında gözlemlenen yeşil floresans, viral gen ekspresyonunu ve rekombinant RSV üretiminin baş
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin